24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2107  |  回复: 19

aofeng860308

木虫 (正式写手)

[求助] 质粒转化与表达

最近做一批重组质粒,测序正确。打算转rosetta和bl21做表达,然而经过好几次的折腾,就是一个菌不长。排除了感受态,抗性,质粒质量及操作过程中的问题,可是依然没能解决问题。我想问一下还有哪些可能的因素影响质粒的转化。还有一个问题,我做了一个NusA做融合伴侣的重组质粒,转化表达质粒成功后不表达,没有移码,用IPTG 0.5mM诱导3h,无任何表达。请大侠们帮忙看看到底是哪里出现了问题。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

山轻水秀

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流! 2012-08-09 19:50:31
aofeng860308: 回帖置顶 2012-08-09 21:50:47
1.你确定你说的那些都没问题吗,比如抗性,会不会加多了,几乎都杀死了。
2.“重组质粒,测序正确”是什么意思?你的质粒本身就是已经重组完的吗?还是说pcr产物序列正确?如果你经过连接的话,是不是你连接的比例有误?
万变不离其宗,以明确的计划,灵活的方法,创造属于自己的天地
3楼2012-08-09 15:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

无踪无影

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aofeng860308: 金币+20, 有帮助, 1 2012-08-09 21:50:22
小丹木木: 金币-19, 楼主收回多给的19个金币 2012-08-10 08:15:32
你这没长菌 会不会是菌被你涂板时候烫死了呢?
一切皆有可能
2楼2012-08-09 15:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-08-09 15:24:24
你这没长菌 会不会是菌被你涂板时候烫死了呢?

我很多时候不用涂布棒,直接摇匀的,也不长。
4楼2012-08-09 21:44:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 山轻水秀 at 2012-08-09 15:46:10
1.你确定你说的那些都没问题吗,比如抗性,会不会加多了,几乎都杀死了。
2.“重组质粒,测序正确”是什么意思?你的质粒本身就是已经重组完的吗?还是说pcr产物序列正确?如果你经过连接的话,是不是你连接的比例 ...

抗性我做过10ug/ml,20ug/ml 50ug/ml还是没有长。
就是说我的质粒构建成功了,确定已经将目的片段装进了载体。但是表达不出来。
5楼2012-08-09 21:49:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

山轻水秀

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-08-09 21:49:10
抗性我做过10ug/ml,20ug/ml 50ug/ml还是没有长。
就是说我的质粒构建成功了,确定已经将目的片段装进了载体。但是表达不出来。...

我有一事不明,就是既然你载体表达不出来,那你怎么构建的?不也是经过转化最后提质粒得来的吗?
万变不离其宗,以明确的计划,灵活的方法,创造属于自己的天地
6楼2012-08-10 07:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

damaomao

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

7楼2012-08-10 09:47:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无踪无影

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by aofeng860308 at 2012-08-09 21:44:52
我很多时候不用涂布棒,直接摇匀的,也不长。...

哦  祝你好运
一切皆有可能
8楼2012-08-10 11:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 山轻水秀 at 2012-08-10 07:31:37
我有一事不明,就是既然你载体表达不出来,那你怎么构建的?不也是经过转化最后提质粒得来的吗?...

开始我都是做连接转化的,转化效率有点低,都是长一个两个的,测序了下,这些长出来都是阳性的,等构建结束后进行表达的时候竟然没有表达。然后再做其他菌的转化就做不出来了!
9楼2012-08-10 22:30:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aofeng860308

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by damaomao at 2012-08-10 09:47:39
确定转到rosetta和bl21里面了吗

确定,做了其他质粒的表达,没有问题。
10楼2012-08-10 22:32:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aofeng860308 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂,一志愿厦门大学,生物与医药,总分272,本科211 +3 Electron1cc 2026-04-01 4/200 2026-04-05 20:24 by lys0704
[考研] 求调剂,一志愿郑州大学材料与化工专硕,英二数二342分,求老师收留 +18 v12abo 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 11:37 by a8144223
[考研] 324求调剂 +9 想上学求调 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:57 by 果冻大王
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 291求调剂 +4 迷蒙木木 2026-04-01 5/250 2026-04-04 15:59 by sihailian3
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 266分,求材料相关专业调剂 +13 哇呼哼呼哼 2026-03-30 15/750 2026-04-03 15:24 by arrow8852
[考研] 315分 085602 求调剂 +15 26考研上岸版26 2026-04-02 15/750 2026-04-03 12:45 by xingguangj
[考研] 366求调剂 +7 sbdnd 2026-04-03 7/350 2026-04-03 12:40 by cymywx
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 318求调剂,计算材料方向 +10 吸喵有害笙命 2026-04-01 11/550 2026-04-02 16:29 by oooqiao
[考研] 农学考研求调剂 +3 dkdkxm 2026-04-01 3/150 2026-04-02 16:04 by wangjagri
[考研] 377求调剂 +3 RASKIN 2026-04-02 3/150 2026-04-02 09:45 by zzchen2000
[考研] 070300化学279求调剂 +15 哈哈哈^_^ 2026-03-31 17/850 2026-04-01 21:37 by 给你你注意休息
[考研] 353求调剂 +4 拉钩不许变 2026-04-01 4/200 2026-04-01 18:10 by 记事本2026
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:32 by 图鉴212
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
信息提示
请填处理意见