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aofeng860308

木虫 (正式写手)

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[求助] 质粒转化与表达

最近做一批重组质粒，测序正确。打算转rosetta和bl21做表达，然而经过好几次的折腾，就是一个菌不长。排除了感受态，抗性，质粒质量及操作过程中的问题，可是依然没能解决问题。我想问一下还有哪些可能的因素影响质粒的转化。还有一个问题，我做了一个NusA做融合伴侣的重组质粒，转化表达质粒成功后不表达，没有移码，用IPTG 0.5mM诱导3h，无任何表达。请大侠们帮忙看看到底是哪里出现了问题。

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1楼 2012-08-09 10:00:45

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aofeng860308

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-08-09 15:24:24
你这没长菌会不会是菌被你涂板时候烫死了呢？

我很多时候不用涂布棒，直接摇匀的，也不长。

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4楼2012-08-09 21:44:52

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aofeng860308

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3楼: Originally posted by 山轻水秀 at 2012-08-09 15:46:10
1.你确定你说的那些都没问题吗，比如抗性，会不会加多了，几乎都杀死了。
2.“重组质粒，测序正确”是什么意思？你的质粒本身就是已经重组完的吗？还是说pcr产物序列正确？如果你经过连接的话，是不是你连接的比例 ...

抗性我做过10ug/ml,20ug/ml 50ug/ml还是没有长。
就是说我的质粒构建成功了，确定已经将目的片段装进了载体。但是表达不出来。

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5楼2012-08-09 21:49:10

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