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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 两个质粒同时转大肠DH5α
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番茄培养基

铁虫 (小有名气)

[求助] 两个质粒同时转大肠DH5α 已有3人参与

各位大神：小弟想知道DH5α的一些详细信息，可是查不到。例如菌种是否含有游离质粒等等。还有一个问题想请教，我的质粒酶切后用T4连接酶链接，转入大肠中。但是T4链接后，估计有没连上的，这样混合导入大肠中，是否可行？ 该大肠万一一起导入了两种质粒，可以复制吗？ 拜托了
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做好自己的事情就行了！
1楼 2014-04-06 23:56:10
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
番茄培养基(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-07 10:08:00
DH5a 无游离质量，详细情况参加连接：http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/DH5_alpha
至于你说的共转化问题，如果你目的片段没有连接上去，但你载体自连的话就有可能存在你说的问题。如果自连，当然能复制。不过不用担心一般我们酶切后的粘性末端不是同种妹切位点，所以一般不会自连。如果发生，你测序结果就能看出来哈！
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互助互励，共奋共进！！
2楼2014-04-07 09:48:56
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
概念问题，
1 质粒相容性
某种原核生物能否容纳一种以上的质粒，或者哪几种质粒可以共存，这个主要取决于这些质粒的“复制子”是否相容。这个方面的详细信息去看《分子克隆》3rd好了。
另外，同一个菌中同时又两种甚至以上质粒共存的简单例子很多，比如腺病毒用来重组腺病毒基因组的宿主菌，已经含有了一个很大的质粒。又比如原核表达常用的什么pLsisS，Rosetta之类。
2 感受态的效率
感受态的效率用两个指标评价，常用的比如说某个感受态达到了10的多少次方，说的是0.1 ng pUC19这个质粒，转化一定体积的感受态，能形成这么多克隆。
这是务实的一种评价，也就是说我只关心我转化之后能把我的DNA多少转进去。
另一种评估效率是一定感受态细胞，有多少能够被转化，这反映的是感受态的绝对质量。
可以想象，人类制备的感受态，其效率不可能高到一个细胞可以分配1个以上的质粒。
所以平时不可能出现做个转化，嘿，某一个转化子转进去了2个质粒甚至更多。
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3楼2014-04-07 14:57:14
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DH5α就是为提质粒而生的，所以当然没有其他游离质粒了，连接的话，要是连上了就能表达，至于两个质粒同时转进去，那就跟楼上说的，看相容性了。。。
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Someone
4楼2014-04-08 08:43:12
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