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两个质粒同时转大肠DH5α 已有3人参与
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| 各位大神：小弟想知道DH5α的一些详细信息，可是查不到。例如菌种是否含有游离质粒等等。还有一个问题想请教，我的质粒酶切后用T4连接酶链接，转入大肠中。但是T4链接后，估计有没连上的，这样混合导入大肠中，是否可行？ 该大肠万一一起导入了两种质粒，可以复制吗？ 拜托了 |
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biostar2009
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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概念问题， 1 质粒相容性 某种原核生物能否容纳一种以上的质粒，或者哪几种质粒可以共存，这个主要取决于这些质粒的“复制子”是否相容。这个方面的详细信息去看《分子克隆》3rd好了。 另外，同一个菌中同时又两种甚至以上质粒共存的简单例子很多，比如腺病毒用来重组腺病毒基因组的宿主菌，已经含有了一个很大的质粒。又比如原核表达常用的什么pLsisS，Rosetta之类。 2 感受态的效率 感受态的效率用两个指标评价，常用的比如说某个感受态达到了10的多少次方，说的是0.1 ng pUC19这个质粒，转化一定体积的感受态，能形成这么多克隆。 这是务实的一种评价，也就是说我只关心我转化之后能把我的DNA多少转进去。 另一种评估效率是一定感受态细胞，有多少能够被转化，这反映的是感受态的绝对质量。 可以想象，人类制备的感受态，其效率不可能高到一个细胞可以分配1个以上的质粒。 所以平时不可能出现做个转化，嘿，某一个转化子转进去了2个质粒甚至更多。 |
3楼2014-04-07 14:57:14
Sthunder
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【答案】应助回帖
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番茄培养基(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-07 10:08:00
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番茄培养基(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-04-07 10:08:00
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DH5a 无游离质量，详细情况参加连接：http://ecoliwiki.net/colipedia/index.php/DH5_alpha 至于你说的共转化问题，如果你目的片段没有连接上去，但你载体自连的话就有可能存在你说的问题。如果自连，当然能复制。不过不用担心一般我们酶切后的粘性末端不是同种妹切位点，所以一般不会自连。如果发生，你测序结果就能看出来哈！ |
2楼2014-04-07 09:48:56
Hliotrope
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4楼2014-04-08 08:43:12
