应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀
211/3返回列表123下一页
查看: 2771  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

yujiajia

铁虫 (初入文坛)

[求助] 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀

有没有人遇到过这种情况，过夜摇转化到大肠杆菌的阳性质粒，发现第二天早上试管底部有很多白色沉淀，沉淀边缘有颗粒，含Amp的液体lb液体清亮，这是什么原因啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
坚持
1楼 2012-11-17 16:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒没转化到受体菌里，有白色沉淀可能是被杀死的大肠杆菌
赞一下 回复此楼
2楼2012-11-17 17:03:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-11-19 13:37:40
大肠电、化转化的复苏不是要1个小时就可以了吗？如果是温敏型得用低温培养，那2个小时也足够了呀，怎么要过夜呢？不过貌似我也遇到过复苏阶段，感受态沉降（若是菌体没有鞭毛，更容易沉降）了，再摇起来过个10min再涂布，结果还是长出来了（人品啊!）。
下次你再遇到，可以弃上清，取一半涂个无抗板看看，是不是长满板（说明活性还行），就知道是不是死菌了；
不过你还是先确认一下是不是一定得过夜？！
赞一下 回复此楼
3楼2012-11-17 17:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyll1988

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
沉淀中大部分都应该是在转化过程中产生的死菌，一半3h就可以复苏了，为什么要那么长时间啊?
赞一下 回复此楼
4楼2012-11-17 20:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室一般复苏1h，那么长时间肯定大部分是死菌！
赞一下 回复此楼
5楼2012-11-17 22:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
筛选平板上的Amp部分失效，克隆为假阳性，液体培养时抗生素不完全杀死或者抑制菌体生长，所以沉淀在底部。
赞一下 回复此楼
6楼2012-11-18 01:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-17 17:36:25
大肠电、化转化的复苏不是要1个小时就可以了吗？如果是温敏型得用低温培养，那2个小时也足够了呀，怎么要过夜呢？不过貌似我也遇到过复苏阶段，感受态沉降（若是菌体没有鞭毛，更容易沉降）了，再摇起来过个10min再 ...

我这个不是做电转的，就是连到克隆载体上，再转化到大肠杆菌DH5a里的，后面的过夜培养是为了提取质粒
赞一下 回复此楼
坚持
7楼2012-11-19 23:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-17 17:03:58
质粒没转化到受体菌里，有白色沉淀可能是被杀死的大肠杆菌

我摇的是经过筛选的阳性菌，跑菌液pcr有目的条带的
赞一下 回复此楼
坚持
8楼2012-11-19 23:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yyll1988 at 2012-11-17 20:59:29
沉淀中大部分都应该是在转化过程中产生的死菌，一半3h就可以复苏了，为什么要那么长时间啊?

我这个是摇的经过筛选的阳性质粒，第二天为了提质粒，因为后面还要做酶切
赞一下 回复此楼
坚持
9楼2012-11-19 23:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

氨苄板抗性失效或者菌液加的氨苄抗性浓度太大，最可能的原因是假阳性没转进去，建议重复做一下
赞一下 回复此楼
10楼2012-11-20 09:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yujiajia 的主题更新
211/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 华东师范大学-071000生物学-293分-求调剂 +3 研究生何瑶明 2026-03-18 3/150 2026-03-21 01:30 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +6 薛云鹏 2026-03-15 6/300 2026-03-17 11:05 by 学员h26Tkc
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭