24小时热门版块排行榜    

查看: 3283  |  回复: 20

yujiajia

铁虫 (初入文坛)

[求助] 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀

有没有人遇到过这种情况,过夜摇转化到大肠杆菌的阳性质粒,发现第二天早上试管底部有很多白色沉淀,沉淀边缘有颗粒,含Amp的液体lb液体清亮,这是什么原因啊?
回复此楼
坚持
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒没转化到受体菌里,有白色沉淀可能是被杀死的大肠杆菌
2楼2012-11-17 17:03:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czdaeq

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-11-19 13:37:40
大肠电、化转化的复苏不是要1个小时就可以了吗?如果是温敏型得用低温培养,那2个小时也足够了呀,怎么要过夜呢?不过貌似我也遇到过复苏阶段,感受态沉降(若是菌体没有鞭毛,更容易沉降)了,再摇起来过个10min再涂布,结果还是长出来了(人品啊!)。
下次你再遇到,可以弃上清,取一半涂个无抗板看看,是不是长满板(说明活性还行),就知道是不是死菌了;
不过你还是先确认一下是不是一定得过夜?!
3楼2012-11-17 17:36:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyll1988

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
沉淀中大部分都应该是在转化过程中产生的死菌,一半3h就可以复苏了,为什么要那么长时间啊?
4楼2012-11-17 20:59:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们实验室一般复苏1h,那么长时间肯定大部分是死菌!
5楼2012-11-17 22:04:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
筛选平板上的Amp部分失效,克隆为假阳性,液体培养时抗生素不完全杀死或者抑制菌体生长,所以沉淀在底部。
6楼2012-11-18 01:30:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by czdaeq at 2012-11-17 17:36:25
大肠电、化转化的复苏不是要1个小时就可以了吗?如果是温敏型得用低温培养,那2个小时也足够了呀,怎么要过夜呢?不过貌似我也遇到过复苏阶段,感受态沉降(若是菌体没有鞭毛,更容易沉降)了,再摇起来过个10min再 ...

我这个不是做电转的,就是连到克隆载体上,再转化到大肠杆菌DH5a里的,后面的过夜培养是为了提取质粒
坚持
7楼2012-11-19 23:51:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-17 17:03:58
质粒没转化到受体菌里,有白色沉淀可能是被杀死的大肠杆菌

我摇的是经过筛选的阳性菌,跑菌液pcr有目的条带的
坚持
8楼2012-11-19 23:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiajia

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yyll1988 at 2012-11-17 20:59:29
沉淀中大部分都应该是在转化过程中产生的死菌,一半3h就可以复苏了,为什么要那么长时间啊?

我这个是摇的经过筛选的阳性质粒,第二天为了提质粒,因为后面还要做酶切
坚持
9楼2012-11-19 23:55:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj0311

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

氨苄板抗性失效或者菌液加的氨苄抗性浓度太大,最可能的原因是假阳性没转进去,建议重复做一下
10楼2012-11-20 09:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yujiajia 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:26 by C79jjtjAKjEn
[公派出国] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:14 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 05:34 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
信息提示
请填处理意见