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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 摇的转化到大肠杆菌的质粒有沉淀
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

一般来说过夜摇不会有沉淀的吧，应该菌液都摇起来了，我只有在4℃冰箱放置了几天的E.coli才会有沉淀.
你确定真的摇了一晚上，不会是有段时间摇床没摇了吧
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11楼2012-11-20 17:04:26
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

如果是质粒转化DH5细胞的话其实，不用特别介意这个问题，在我看来应该是质粒浓度太大的原因，你转化质粒的时候最好先稀释下，后来加200ulLB37度培养45min-1h,然后涂板，涂板时注意将沉淀跟上清混匀。。。
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12楼2012-11-21 12:22:44
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xj0311 at 2012-11-20 09:17:29
氨苄板抗性失效或者菌液加的氨苄抗性浓度太大，最可能的原因是假阳性没转进去，建议重复做一下

好的，谢谢
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13楼2012-11-21 21:10:55
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by Marado at 2012-11-20 17:04:26
一般来说过夜摇不会有沉淀的吧，应该菌液都摇起来了，我只有在4℃冰箱放置了几天的E.coli才会有沉淀.
你确定真的摇了一晚上，不会是有段时间摇床没摇了吧

摇床应该是没问题的，我摇的其他的菌都没问题的，悬浮的很均匀
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坚持
14楼2012-11-21 21:12:37
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-21 12:22:44
如果是质粒转化DH5细胞的话其实，不用特别介意这个问题，在我看来应该是质粒浓度太大的原因，你转化质粒的时候最好先稀释下，后来加200ulLB37度培养45min-1h,然后涂板，涂板时注意将沉淀跟上清混匀。。。

下面有沉淀，就是提的质粒的浓度低，确定是阳性的，谢谢了
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15楼2012-11-21 21:18:38
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gzj10_thu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

是死菌
但是不影响蛋白纯化
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16楼2012-11-22 17:42:16
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
15楼: Originally posted by yujiajia at 2012-11-21 21:18:38
下面有沉淀，就是提的质粒的浓度低，确定是阳性的，谢谢了...

提质粒浓度很低？你是直接转化的质粒还是菌种大摇的啊？如果是菌种大摇可能是因为菌种保存不善，这时候最好的方法就是提质粒以后再转化重新摇菌了，之前我试过，你也可以试下。。
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17楼2012-11-22 20:12:34
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-22 20:12:34
提质粒浓度很低？你是直接转化的质粒还是菌种大摇的啊？如果是菌种大摇可能是因为菌种保存不善，这时候最好的方法就是提质粒以后再转化重新摇菌了，之前我试过，你也可以试下。。...

提质粒以后再转化？是不是就是用试剂盒提完质粒以后再重新转化到大肠杆菌DH5中？没这样试过。
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坚持
18楼2012-11-23 21:19:14
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
18楼: Originally posted by yujiajia at 2012-11-23 21:19:14
提质粒以后再转化？是不是就是用试剂盒提完质粒以后再重新转化到大肠杆菌DH5中？没这样试过。...

嗯嗯，是的呢，那样子挑出来的菌比较纯，大题做转染什么的浓度都很高，你可以试试看哈
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19楼2012-11-23 22:39:00
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yujiajia

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by sarah-miao at 2012-11-23 22:39:00
嗯嗯，是的呢，那样子挑出来的菌比较纯，大题做转染什么的浓度都很高，你可以试试看哈...

恩，谢谢哈
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坚持
20楼2012-11-26 00:05:05
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