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Aniabia

木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌CaCl2法转染质粒DNA需要注意哪些方面? 已有4人参与

在实际操作中,需要注意哪些细节呢?谢谢!
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glucidum

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看着《分子克隆》做就行了,已经很详细了
2楼2012-05-07 21:48:37
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
1.注意尽量低温下操作,冰盒是必须的,而且最好是碎冰,碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的,再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的,不知道对不对,反正我制的感受态都不错。不对的地方请指点呀
好孩子!
3楼2012-05-07 23:47:43
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yushenye

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
低温
氯化钙新鲜配制
轻柔操作
Intheway,Onmyway
4楼2012-05-08 10:12:00
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Aniabia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-05-07 23:47:43:
1.注意尽量低温下操作,冰盒是必须的,而且最好是碎冰,碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的,再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的,不知道对不对,反 ...

谢谢!既然你制的感受态不错,那说明这些细节是重要的。学习了。
查阅文献,说是0.3-0.4是最佳OD,与你说的一直;
冰上操作也是需要的。

看来确实需要注意这些细节,谢谢!
5楼2012-05-08 15:58:02
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Aniabia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yushenye at 2012-05-08 10:12:00:
低温
氯化钙新鲜配制
轻柔操作

谢谢!
6楼2012-05-08 15:58:16
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foxcl

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-05-07 23:47:43:
1.注意尽量低温下操作,冰盒是必须的,而且最好是碎冰,碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的,再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的,不知道对不对,反 ...

同意啊,只不过我们的做法是

先过夜摇菌,等要做感受态的时候,取100 uL到5mL的LB试管中,再摇2-3h即可。

全程操作低温是必须的

悬浮操作必须温柔

我们用氯化钙500ul洗一次,再加100uL氯化钙保存。
7楼2012-05-08 21:05:40
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Aniabia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by foxcl at 2012-05-08 21:05:40:
同意啊,只不过我们的做法是

先过夜摇菌,等要做感受态的时候,取100 uL到5mL的LB试管中,再摇2-3h即可。

全程操作低温是必须的

悬浮操作必须温柔

我们用氯化钙500ul洗一次,再加100uL氯化钙保存。

谢谢!
8楼2012-05-09 08:01:03
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