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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 大肠杆菌CaCl2法转染质粒DNA需要注意哪些方面？
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Aniabia

木虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌CaCl2法转染质粒DNA需要注意哪些方面？ 已有4人参与

在实际操作中，需要注意哪些细节呢？谢谢！
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1楼 2012-05-07 17:03:59
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glucidum

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看着《分子克隆》做就行了，已经很详细了
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2楼2012-05-07 21:48:37
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1.注意尽量低温下操作，冰盒是必须的，而且最好是碎冰，碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的，再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的，不知道对不对，反正我制的感受态都不错。不对的地方请指点呀
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好孩子！
3楼2012-05-07 23:47:43
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yushenye

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
低温
氯化钙新鲜配制
轻柔操作
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Intheway,Onmyway
4楼2012-05-08 10:12:00
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Aniabia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-05-07 23:47:43:
1.注意尽量低温下操作，冰盒是必须的，而且最好是碎冰，碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的，再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的，不知道对不对，反 ...

谢谢！既然你制的感受态不错，那说明这些细节是重要的。学习了。
查阅文献，说是0.3-0.4是最佳OD，与你说的一直；
冰上操作也是需要的。

看来确实需要注意这些细节，谢谢！
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5楼2012-05-08 15:58:02
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Aniabia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yushenye at 2012-05-08 10:12:00:
低温
氯化钙新鲜配制
轻柔操作

谢谢！
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6楼2012-05-08 15:58:16
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foxcl

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-05-07 23:47:43:
1.注意尽量低温下操作，冰盒是必须的，而且最好是碎冰，碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的，再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的，不知道对不对，反 ...

同意啊，只不过我们的做法是

先过夜摇菌，等要做感受态的时候，取100 uL到5mL的LB试管中，再摇2－3h即可。

全程操作低温是必须的

悬浮操作必须温柔

我们用氯化钙500ul洗一次，再加100uL氯化钙保存。
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7楼2012-05-08 21:05:40
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Aniabia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by foxcl at 2012-05-08 21:05:40:
同意啊，只不过我们的做法是

先过夜摇菌，等要做感受态的时候，取100 uL到5mL的LB试管中，再摇2－3h即可。

全程操作低温是必须的

悬浮操作必须温柔

我们用氯化钙500ul洗一次，再加100uL氯化钙保存。

谢谢！
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8楼2012-05-09 08:01:03
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