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Aniabia

木虫 (正式写手)

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[交流] 大肠杆菌CaCl2法转染质粒DNA需要注意哪些方面？已有4人参与

在实际操作中，需要注意哪些细节呢？谢谢！

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1楼 2012-05-07 17:03:59

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foxcl

铁虫 (正式写手)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-05-07 23:47:43:
1.注意尽量低温下操作，冰盒是必须的，而且最好是碎冰，碎冰感觉效果好。
2.OD长到0.3多点我感觉是最好的，再大了觉得长的菌体太多了。
3.用氯化钙最好洗两遍或者三遍
我做的时候自己总结的，不知道对不对，反 ...

同意啊，只不过我们的做法是

先过夜摇菌，等要做感受态的时候，取100 uL到5mL的LB试管中，再摇2－3h即可。

全程操作低温是必须的

悬浮操作必须温柔

我们用氯化钙500ul洗一次，再加100uL氯化钙保存。