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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » Co-ip：两种过表达质粒共转同一株细胞里，检测两个蛋白的相互作用
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个

[交流] Co-ip：两种过表达质粒共转同一株细胞里，检测两个蛋白的相互作用 已有1人参与

求助：
1. 两种质粒的量怎么加？是1：1吗？
2. 怎么加质粒？是同时加进去，还是先转进去一个稳定之后再转另一个？
3. 需要细胞量是多少？

谢谢！！！
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奇迹源于自信，脚踏实地！
1楼 2015-01-08 08:37:39
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)
★
bio.shk: 金币+1, 谢谢 灰常感谢 2015-01-08 08:57:14
路过的看了一下，帮顶~~~~~~~~~~~~~~~~~~
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自强不息，厚德载物；独立精神，自由思想。
2楼2015-01-08 08:51:30
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肚糠稀同学

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bio.shk: 金币+1, 谢谢 2015-01-08 10:22:16
小的不做这方面的  也不懂   帮顶呗！
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3楼2015-01-08 10:20:08
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翼在天

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bio.shk: 金币+1 2015-01-09 11:51:09
你好，我不知道你这个质粒怎么转，只是想问一下，在这个实验设计的时候有考虑过质粒的不相容性吗？两个质粒同时转入一个细胞的时候会有这种问题。
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4楼2015-01-08 13:11:21
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)
★
bio.shk: 金币+1 2015-01-09 11:51:12
blessing
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5楼2015-01-08 13:41:22
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bio.shk(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-08 20:50:58
bio.shk: 金币+2, 谢谢 回复的很详细 2015-01-09 11:50:28
一般两种一起加进去比较省事，实验周期短。两种的比例，要根据具体情况分析，如果没有其他信息辅助，那就1:1加。转的方法很多，脂质体类的转染试剂比较常用，电转，或者其他转染的方法都可以尝试。
细胞的用量，取决于你特定蛋白的表达量，Co-iP也不大熟，看看别人的回答吧
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6楼2015-01-08 16:01:29
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个
引用回帖:
4楼: Originally posted by 翼在天 at 2015-01-08 13:11:21
你好，我不知道你这个质粒怎么转，只是想问一下，在这个实验设计的时候有考虑过质粒的不相容性吗？两个质粒同时转入一个细胞的时候会有这种问题。

怎么判断它们有没有相容性呢？
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奇迹源于自信，脚踏实地！
7楼2015-01-09 11:51:38
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个
引用回帖:
5楼: Originally posted by mzhyan at 2015-01-08 13:41:22
blessing

thks
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奇迹源于自信，脚踏实地！
8楼2015-01-09 12:03:48
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翼在天

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by bio.shk at 2015-01-09 11:51:38
怎么判断它们有没有相容性呢？...

一般来讲，携带相同复制子的不同质粒不共存于同一细菌中，带有不可互换成分的复制子的质粒则可以共存于同一细菌中。
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9楼2015-01-09 14:53:12
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bio.shk(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-10 20:04:14
bio.shk: 金币+8, 嗯 回复的很详细 谢谢 2015-01-11 19:29:54
1：可以1:1加；之后视情况调整。
2：都可以，稳赚后的效果更明显（但假阳性可能也更高）。推荐先做瞬转再看情况，一般瞬转就可以了。
3：我一般用60mm dish，足够。不放心可以多做一点，我第一次100mm做的。之后都60mm。
另：不相容性主要在原核细胞中需要考虑。瞬转到真核没必要考虑。
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10楼2015-01-09 23:52:36
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