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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个

[交流] Co-ip:两种过表达质粒共转同一株细胞里,检测两个蛋白的相互作用已有1人参与

求助:
1. 两种质粒的量怎么加?是1:1吗?
2. 怎么加质粒?是同时加进去,还是先转进去一个稳定之后再转另一个?
3. 需要细胞量是多少?

谢谢!!!
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奇迹源于自信,脚踏实地!
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阿Q~~

至尊木虫 (文坛精英)


bio.shk: 金币+1, 谢谢 灰常感谢 2015-01-08 08:57:14
路过的看了一下,帮顶~~~~~~~~~~~~~~~~~~
自强不息,厚德载物;独立精神,自由思想。
2楼2015-01-08 08:51:30
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肚糠稀同学

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bio.shk: 金币+1, 谢谢 2015-01-08 10:22:16
小的不做这方面的  也不懂   帮顶呗!
3楼2015-01-08 10:20:08
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翼在天

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bio.shk: 金币+1 2015-01-09 11:51:09
你好,我不知道你这个质粒怎么转,只是想问一下,在这个实验设计的时候有考虑过质粒的不相容性吗?两个质粒同时转入一个细胞的时候会有这种问题。
4楼2015-01-08 13:11:21
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mzhyan

至尊木虫 (文坛精英)


bio.shk: 金币+1 2015-01-09 11:51:12
blessing
5楼2015-01-08 13:41:22
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zhuguozhen1115

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bio.shk(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-08 20:50:58
bio.shk: 金币+2, 谢谢 回复的很详细 2015-01-09 11:50:28
一般两种一起加进去比较省事,实验周期短。两种的比例,要根据具体情况分析,如果没有其他信息辅助,那就1:1加。转的方法很多,脂质体类的转染试剂比较常用,电转,或者其他转染的方法都可以尝试。
细胞的用量,取决于你特定蛋白的表达量,Co-iP也不大熟,看看别人的回答吧
6楼2015-01-08 16:01:29
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个

引用回帖:
4楼: Originally posted by 翼在天 at 2015-01-08 13:11:21
你好,我不知道你这个质粒怎么转,只是想问一下,在这个实验设计的时候有考虑过质粒的不相容性吗?两个质粒同时转入一个细胞的时候会有这种问题。

怎么判断它们有没有相容性呢?
奇迹源于自信,脚踏实地!
7楼2015-01-09 11:51:38
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bio.shk

铁杆木虫 (正式写手)

真相只有一个

引用回帖:
5楼: Originally posted by mzhyan at 2015-01-08 13:41:22
blessing

thks
奇迹源于自信,脚踏实地!
8楼2015-01-09 12:03:48
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翼在天

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by bio.shk at 2015-01-09 11:51:38
怎么判断它们有没有相容性呢?...

一般来讲,携带相同复制子的不同质粒不共存于同一细菌中,带有不可互换成分的复制子的质粒则可以共存于同一细菌中。
9楼2015-01-09 14:53:12
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bio.shk(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-10 20:04:14
bio.shk: 金币+8, 嗯 回复的很详细 谢谢 2015-01-11 19:29:54
1:可以1:1加;之后视情况调整。
2:都可以,稳赚后的效果更明显(但假阳性可能也更高)。推荐先做瞬转再看情况,一般瞬转就可以了。
3:我一般用60mm dish,足够。不放心可以多做一点,我第一次100mm做的。之后都60mm。
另:不相容性主要在原核细胞中需要考虑。瞬转到真核没必要考虑。
10楼2015-01-09 23:52:36
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