应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 如何实现质粒的稳定转染？
91/1返回列表
查看: 4130  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

flybirdfly

木虫 (正式写手)

奋斗者

[求助] 如何实现质粒的稳定转染？ 已有4人参与

小虫现需要将一仅带有氨苄西林霉素基因的质粒稳定转染293T细胞，不知使用何种方法。有文献中是这样做的：将该质粒与pCDNA3以4:1的比例共转染（因为pCDNA3中含有neomycin的基因），然后就可以用G418筛选出稳转的细胞株。另有人说建议用Linear Selection Marker，如Linear Puromycin Marker，使具有嘌呤霉素抗性，然后用抗性培养基多次筛选。我想问一下这两种方法哪个更靠谱一点？请各位虫友不吝赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Your attitude, not your aptitude, will determine your altitude. 努力！奋斗！
1楼 2014-03-17 10:56:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
共转pCDNA 3.1是可以的，原则上pCDNA 3.1转染进了，你的目的基因也应该转染了，第二种没做过，但是也是用抗性筛选的吧
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-17 12:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看看质粒的真核筛选基因，一般是neo抗性就用G418筛选
赞一下 回复此楼
3楼2014-03-18 10:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都可以，以前实验室常用G418，效果不错。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-18 14:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
给你的目的基因换一个稳定表达的载体吧。感觉pCDNA3.1做瞬时转染效果很好，但做稳定转染不是很稳定。个人更喜欢Puromycin作为抗性筛选。
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-18 15:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星期天我放风
6楼2014-03-18 21:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hailey

银虫 (小有名气)
想问一下。。。筛选抗性所用G418 的浓度是多少？？
赞一下 回复此楼
时刻为梦想而战！！
7楼2014-07-13 15:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)
带有neo基因可以进行稳转细胞系建立，然后利用MTX加压筛选不断一轮一轮的筛选最终也能够进行稳转株筛选，我们经常用第二种方式，时间持续较长得到的稳转株也能够实现稳定高表达的生产，可以根据你的情况或时间啊选择一种更合适的。楼上有的说做瞬时转染好，其实也是啊，如果你还没有做过瞬转的话可以先做瞬转看看你的目的基因表达出来的东西性能怎样是不是符合要求，因为瞬时转染生产少量的蛋白满足检测如果后续你需要大量的生产在考虑构建稳定细胞系，比较筛选稳转株需要长时间，要是已经做过瞬转就不需要考虑了
赞一下 回复此楼
8楼2015-11-05 10:39:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ZYJLL

新虫 (小有名气)
请问最后你怎么解决的呀，有没有用linear selection marker呀

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
9楼2018-07-16 11:42:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 flybirdfly 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600材料与化工 +6 安全上岸！ 2026-03-16 6/300 2026-03-20 15:07 by lbsjt
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +6 adaie 2026-03-19 6/300 2026-03-20 14:12 by 星空星月
[考研] 一志愿中南化学337求调剂 +4 niko- 2026-03-19 5/250 2026-03-20 13:49 by 促天成
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-18 8/400 2026-03-20 12:12 by 学员8dgXkO
[考研] 307求调剂 +9 冷笙123 2026-03-17 9/450 2026-03-19 22:44 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 一志愿天大材料与化工（085600）总分338 +5 蔡大美女 2026-03-13 5/250 2026-03-19 10:44 by 是小刘呀～
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭