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flybirdfly

木虫 (正式写手)

奋斗者

[求助] 如何实现质粒的稳定转染? 已有4人参与

小虫现需要将一仅带有氨苄西林霉素基因的质粒稳定转染293T细胞,不知使用何种方法。有文献中是这样做的:将该质粒与pCDNA3以4:1的比例共转染(因为pCDNA3中含有neomycin的基因),然后就可以用G418筛选出稳转的细胞株。另有人说建议用Linear Selection Marker,如Linear Puromycin Marker,使具有嘌呤霉素抗性,然后用抗性培养基多次筛选。我想问一下这两种方法哪个更靠谱一点?请各位虫友不吝赐教
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Your attitude, not your aptitude, will determine your altitude. 努力!奋斗!
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c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
都可以,以前实验室常用G418,效果不错。
4楼2014-03-18 14:19:12
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
共转pCDNA 3.1是可以的,原则上pCDNA 3.1转染进了,你的目的基因也应该转染了,第二种没做过,但是也是用抗性筛选的吧
2楼2014-03-17 12:21:14
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weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看看质粒的真核筛选基因,一般是neo抗性就用G418筛选
3楼2014-03-18 10:25:43
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simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
给你的目的基因换一个稳定表达的载体吧。感觉pCDNA3.1做瞬时转染效果很好,但做稳定转染不是很稳定。个人更喜欢Puromycin作为抗性筛选。
5楼2014-03-18 15:01:29
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