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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » RNA干扰实验是直接转染RNA还是转染表达该RNA的质粒？
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scncwxy

木虫 (著名写手)

[交流] RNA干扰实验是直接转染RNA还是转染表达该RNA的质粒？

siRNA和miRNA干扰的研究中，是直接转染RNA还是转染编码该RNA的质粒呢？两者各有什么优缺点？
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1楼 2013-01-11 17:05:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
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scncwxy: 金币+2, 我也看到很多文献是直接转染RNA的 2013-01-12 09:18:41
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-28 17:21:38
当然是转表达RNA的质粒啦。你转RNA进去了也会很快降解掉，即使稳定存在一阵子，也不会随着细胞复制而复制，只能瞬时抑制。
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2楼2013-01-12 07:12:02
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对月流珠

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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scncwxy: 金币+2, 我也看到很多文献是直接转染RNA的 2013-01-12 09:18:49
肯定是转染表达RNA的质粒了
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3楼2013-01-12 09:14:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
scncwxy: 金币+2 2013-01-13 10:25:23
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-12 07:12:02
当然是转表达RNA的质粒啦。你转RNA进去了也会很快降解掉，即使稳定存在一阵子，也不会随着细胞复制而复制，只能瞬时抑制。

RNAi的概念开始是从病毒启发的。我想直接转RNA是参考了RNA病毒作用的机理。不过，如果想得到稳定抑制的突变株，应该是转DNA进去。
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4楼2013-01-12 12:00:05
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weiwei_l

木虫 (职业作家)
加油楼主
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5楼2013-01-12 12:52:41
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porphybaby

金虫 (正式写手)
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scncwxy: 金币+2, 我们研究方向一致，想问这两种方式的转染对于相关基因沉默有何差别 2013-01-13 10:23:16
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-04-28 17:22:01
看你什么目的吧~~~

我们就有研究 用 一些 纳米载体 去 载siRNA 或者 microRNA 之类的

之后起到调控肿瘤细胞增殖凋亡的 作用 或者改变耐药性啊 影响血管生成啊迁移啊之类的~~~

那样就是直接转染的，没有用质粒。
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6楼2013-01-12 16:30:44
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jiangronglu

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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scncwxy(gyesang代发): 金币+1, 鼓励交流！ 2013-04-28 17:22:25
RNA干扰（RNAi）：近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。

MicroRNA（miRNA,微RNA）：即为长度为22nt左右的5′端带磷酸基团、3′端带羟基的非蛋白编码的调控小RNA家族。

小的干涉RNA（siRNA）：是在RNA干涉过程中人工体外合成的小片段RNA，由约20个碱基对组成，包括5个磷酸盐，2个核苷和3个悬臂。

miRNA与siRNA之间有许多相同之处：1.二者的长度都约在22nt左右。2.二者都依赖Dicer酶的加工，是Dicer的产物，所以具有Dicer产物的特点。3.二者生成都需要Argonaute家族蛋白存在。4.二者都是RISC组分，所以其功能界限变得不清晰，如二者在介导沉默机制上有重叠。5.miRNA和siRNA合成都是由双链的RNA或RNA前体形成的。

miRNA与siRNA的不同点：1.根本区别是miRNA是内源的，是生物体的固有因素；而siRNA是人工体外合成的，通过转染进入人体内，是RNA干涉的中间产物。2.结构上，miRNA是单链RNA，而siRNA是双链RNA。3.Dicer酶对二者的加工过程不同，miRNA是不对称加工，miRNA仅是剪切pre-miRNA的一个侧臂，其他部分降解；而siRNA对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂。4.在作用位置上，miRNA主要作用于靶标基因3′-UTR区，而siRNA可作用于mRNA的任何部位。5.在作用方式上，miRNA可抑制靶标基因的翻译，也可以导致靶标基因降解，即在转录水平后和翻译水平起作用，而siRNA只能导致靶标基因的降解，即为转录水平后调控。6.miRNA主要在发育过程中起作用，调节内源基因表达，而siRNA不参与生物生长，是RNAi的产物，原始作用是抑制转座子活性和病毒感染。
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7楼2013-04-15 19:12:43
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wanghuiym8楼
2015-11-19 20:56   回复  
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