24小时热门版块排行榜    

查看: 4542  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

flybirdfly

木虫 (正式写手)

奋斗者

[求助] 如何实现质粒的稳定转染? 已有4人参与

小虫现需要将一仅带有氨苄西林霉素基因的质粒稳定转染293T细胞,不知使用何种方法。有文献中是这样做的:将该质粒与pCDNA3以4:1的比例共转染(因为pCDNA3中含有neomycin的基因),然后就可以用G418筛选出稳转的细胞株。另有人说建议用Linear Selection Marker,如Linear Puromycin Marker,使具有嘌呤霉素抗性,然后用抗性培养基多次筛选。我想问一下这两种方法哪个更靠谱一点?请各位虫友不吝赐教
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Your attitude, not your aptitude, will determine your altitude. 努力!奋斗!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
给你的目的基因换一个稳定表达的载体吧。感觉pCDNA3.1做瞬时转染效果很好,但做稳定转染不是很稳定。个人更喜欢Puromycin作为抗性筛选。
5楼2014-03-18 15:01:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
共转pCDNA 3.1是可以的,原则上pCDNA 3.1转染进了,你的目的基因也应该转染了,第二种没做过,但是也是用抗性筛选的吧
2楼2014-03-17 12:21:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看看质粒的真核筛选基因,一般是neo抗性就用G418筛选
3楼2014-03-18 10:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
都可以,以前实验室常用G418,效果不错。
4楼2014-03-18 14:19:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:19 by xiangy672
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见