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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 如何实现质粒的稳定转染？
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flybirdfly

木虫 (正式写手)

奋斗者

[求助] 如何实现质粒的稳定转染？ 已有4人参与

小虫现需要将一仅带有氨苄西林霉素基因的质粒稳定转染293T细胞，不知使用何种方法。有文献中是这样做的：将该质粒与pCDNA3以4:1的比例共转染（因为pCDNA3中含有neomycin的基因），然后就可以用G418筛选出稳转的细胞株。另有人说建议用Linear Selection Marker，如Linear Puromycin Marker，使具有嘌呤霉素抗性，然后用抗性培养基多次筛选。我想问一下这两种方法哪个更靠谱一点？请各位虫友不吝赐教
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1楼 2014-03-17 10:56:13
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simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
给你的目的基因换一个稳定表达的载体吧。感觉pCDNA3.1做瞬时转染效果很好，但做稳定转染不是很稳定。个人更喜欢Puromycin作为抗性筛选。
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5楼2014-03-18 15:01:29
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
共转pCDNA 3.1是可以的，原则上pCDNA 3.1转染进了，你的目的基因也应该转染了，第二种没做过，但是也是用抗性筛选的吧
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2楼2014-03-17 12:21:14
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weskerZXC

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看看质粒的真核筛选基因，一般是neo抗性就用G418筛选
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3楼2014-03-18 10:25:43
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c_jade

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
都可以，以前实验室常用G418，效果不错。
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4楼2014-03-18 14:19:12
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