24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2719  |  回复: 12

chen860729

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】G418筛选稳定转染 已有5人参与

转染pEGFP-N1载体,然后用G418筛选,筛选很长时间,细胞没有死亡,但是没有表达绿色荧光。pEGFP-N1载体能整合到真核细胞的染色体上吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不一定的,看你的同源的效果了
2楼2010-10-04 16:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:16
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能,先设一个筛选浓度的梯度,看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长,就用那个浓度筛选
3楼2010-10-04 17:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我本兽医

铁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:26
我也做稳定筛选方面的实验,也遇到了您所说的问题,已经持续快一年了,始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体,最好还是要尝试一下病毒载体。
4楼2010-10-04 22:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-10-04 17:58:53:
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能,先设一个筛选浓度的梯度,看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长,就用那个浓度筛选

我们用的浓度是对照组的细胞在六天到七天全部死亡,这个浓度可以吗?
5楼2010-10-05 15:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-10-04 16:16:30:
不一定的,看你的同源的效果了

用的是脂质体转染的,能整合到染色体上吗?
6楼2010-10-05 15:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:37
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-10-05 15:18:07:

用的是脂质体转染的,能整合到染色体上吗?

方法自然是正确的,也是很多人做过的。但不代表一定对你的case能够合适。
LZ检查一下整个实验过程,可能在哪个地方出现了纰漏
7楼2010-10-06 08:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-04 22:54:13:
我也做稳定筛选方面的实验,也遇到了您所说的问题,已经持续快一年了,始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体,最好还是要尝试一下病毒载体。

请问你知道这是什么原因吗?我们筛选的细胞都十几天了,没有死,但是也观察不到荧光
8楼2010-10-06 21:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我本兽医

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-10-06 21:28:48:

请问你知道这是什么原因吗?我们筛选的细胞都十几天了,没有死,但是也观察不到荧光

我尝试过用真核表达载体做稳定表达,两次。每次刚加药筛选时,都有大量细胞死亡,少量细胞存活,到最后加大药物浓度,细胞也不死了,就拿去用荧光检查,发现没有任何阳性的荧光信号。跟一位博士师兄谈过这个问题,他给出的方法是:1,把构建好的环状质粒,进行酶切,使其线性化。2,重新将目的基因连接到一个病毒载体上(比如腺病毒或者逆转录病毒),因为病毒载体上都会有一种基因,能让病毒的基因组插入到宿主细胞的基因组中(这也是病毒复制的一步)并整合在一起,以此达到我们做稳定表达的目的。
9楼2010-10-07 08:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
本帖仅楼主可见
10楼2015-05-16 15:04:52
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 chen860729 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学085600英一数二337分求调剂 +12 lyz0427 2026-04-03 12/600 2026-04-06 06:37 by houyaoxu
[考研] 0854电子信息319求调剂(接受跨专业调剂) +3 星星不眨眼喽 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:20 by 啵啵啵0119
[考研] 367求调剂 +3 谢28 2026-03-30 3/150 2026-04-05 13:27 by huangmoli
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突, 2026-03-31 4/200 2026-04-04 13:34 by 1753564080
[考研] 278求调剂 +6 Yy7400 2026-04-03 6/300 2026-04-04 09:53 by zhangdingwa
[考研] 266求调剂 +8 学员97LZgn 2026-04-03 8/400 2026-04-04 09:02 by 20021109
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 考研调剂 +3 Draa 2026-04-03 3/150 2026-04-03 17:37 by hgwz7468
[考研] 293求调剂 +5 末未mm 2026-04-02 6/300 2026-04-03 15:20 by 王保杰33
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +19 bradoner 2026-04-01 23/1150 2026-04-03 10:07 by linyelide
[考研] 085600,320分求调剂 +6 大馋小子 2026-04-02 6/300 2026-04-02 21:54 by dongzh2009
[考研] 一志愿郑大材料工程290求调剂 +20 Youth_ 2026-03-30 20/1000 2026-04-02 14:48 by 5896
[考研] 279求调剂 +6 学而思兮知 2026-04-01 6/300 2026-04-02 09:16 by vgtyfty
[考研] 一志愿安徽大学计算机科学与技术学硕,331分求调剂 +5 蒋昌鹏qtj 2026-04-01 5/250 2026-04-02 08:10 by fxue1114
[考研] 一志愿北交大材料工程,总分358 +4 cs0106 2026-04-01 4/200 2026-04-02 07:42 by 尚水阁主
[考研] 求调剂 +4 图鉴212 2026-03-30 5/250 2026-04-01 15:32 by 图鉴212
[考研] 358求调剂 +3 王向阳花 2026-03-31 3/150 2026-04-01 09:56 by zzchen2000
信息提示
请填处理意见