应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】G418筛选稳定转染
131/2返回列表12下一页
查看: 2696  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chen860729

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】G418筛选稳定转染 已有5人参与

转染pEGFP-N1载体，然后用G418筛选，筛选很长时间，细胞没有死亡，但是没有表达绿色荧光。pEGFP-N1载体能整合到真核细胞的染色体上吗？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-10-04 14:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不一定的，看你的同源的效果了
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-10-04 16:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:16
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能，先设一个筛选浓度的梯度，看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长，就用那个浓度筛选
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-10-04 17:58:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:26
我也做稳定筛选方面的实验，也遇到了您所说的问题，已经持续快一年了，始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体，最好还是要尝试一下病毒载体。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-10-04 22:54:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-10-04 17:58:53:
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能，先设一个筛选浓度的梯度，看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长，就用那个浓度筛选

我们用的浓度是对照组的细胞在六天到七天全部死亡，这个浓度可以吗？
赞一下 回复此楼
5楼2010-10-05 15:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-10-04 16:16:30:
不一定的，看你的同源的效果了

用的是脂质体转染的，能整合到染色体上吗？
赞一下 回复此楼
6楼2010-10-05 15:18:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:37
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-10-05 15:18:07:

用的是脂质体转染的，能整合到染色体上吗？

方法自然是正确的，也是很多人做过的。但不代表一定对你的case能够合适。
LZ检查一下整个实验过程，可能在哪个地方出现了纰漏
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-10-06 08:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chen860729

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-04 22:54:13:
我也做稳定筛选方面的实验，也遇到了您所说的问题，已经持续快一年了，始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体，最好还是要尝试一下病毒载体。

请问你知道这是什么原因吗？我们筛选的细胞都十几天了，没有死，但是也观察不到荧光
赞一下 回复此楼
8楼2010-10-06 21:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-10-06 21:28:48:

请问你知道这是什么原因吗？我们筛选的细胞都十几天了，没有死，但是也观察不到荧光

我尝试过用真核表达载体做稳定表达，两次。每次刚加药筛选时，都有大量细胞死亡，少量细胞存活，到最后加大药物浓度，细胞也不死了，就拿去用荧光检查，发现没有任何阳性的荧光信号。跟一位博士师兄谈过这个问题，他给出的方法是：1，把构建好的环状质粒，进行酶切，使其线性化。2，重新将目的基因连接到一个病毒载体上（比如腺病毒或者逆转录病毒），因为病毒载体上都会有一种基因，能让病毒的基因组插入到宿主细胞的基因组中（这也是病毒复制的一步）并整合在一起，以此达到我们做稳定表达的目的。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-10-07 08:50:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖仅楼主可见
赞一下
10楼2015-05-16 15:04:52
已阅   申请MolEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页
相关版块跳转 我要订阅楼主 chen860729 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 求调剂 资源与环境 285 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:31 by houyaoxu
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭