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董珍珍

新虫 (小有名气)

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[求助] 有关稳转NF-kB萤光素酶报告基因的问题

在一本书上看到过这样几句话：“用脂质转染法将pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP（筛选用）以及pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293，加入G418，......选择筛选和维持筛选分别历时4周和6周，已获得稳定转染的HEK293/kB-luc细胞株，扩增HEK293/kB-luc细胞2至3代用于实验。”我不懂作者把pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP共转染细胞的目的，那个pcDAN3.1-GFP是用来做内参的？好像不是，我不是很理解。另外作者为什么又把pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293细胞呢？还请老师指点。非常感谢。

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勤能补拙，熟能生巧！

1楼 2011-04-28 16:34:26

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elvias

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【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 2011-04-28 19:00:52

我看到你这个，我才发现你之前的帖子我理解错了。这种共转染筛选是可以的，但是我个人觉得假阳性比较高，还是单转比较好，但是涉及到报告基因时，这种方法要更方便。你说的文章中，如果为了得到HEK293/kB-luc细胞株，我觉得共转的目的有两个1为增加筛选抗性2通过GFP检测转染效率，优化筛选，因为只有检测到GFP的细胞株才可能得到稳转株。后面的共转看你的描述我也不太清楚~你能否在说详细一点。