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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关稳转NF-kB萤光素酶报告基因的问题
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董珍珍

新虫 (小有名气)

[求助] 有关稳转NF-kB萤光素酶报告基因的问题

在一本书上看到过这样几句话：“用脂质转染法将pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP（筛选用）以及pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293，加入G418，......选择筛选和维持筛选分别历时4周和6周，已获得稳定转染的HEK293/kB-luc细胞株，扩增HEK293/kB-luc细胞2至3代用于实验。”我不懂作者把pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP共转染细胞的目的，那个pcDAN3.1-GFP是用来做内参的？好像不是，我不是很理解。另外作者为什么又把pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293细胞呢？还请老师指点。非常感谢。
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勤能补拙，熟能生巧！
1楼 2011-04-28 16:34:26
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 连续鼓励 2011-04-28 19:01:21
董珍珍(金币+5): 感谢！ 2011-04-28 20:09:34
一般共转染要设立3组，包括阳性对照、阴性对照和实验组。阳性对照是指仅转染有抗性基因的质粒组，阴性对照指仅转染有目的基因的质粒组，实验组指共同转染两种质粒的组。实验组两种质粒要有一个合适的比例，一般来讲抗性质粒：构建质粒=1：10。一般来说是筛选质粒要比构建质粒多。
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3楼2011-04-28 17:37:56
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 2011-04-28 19:00:52
我看到你这个，我才发现你之前的帖子我理解错了。这种共转染筛选是可以的，但是我个人觉得假阳性比较高，还是单转比较好，但是涉及到报告基因时，这种方法要更方便。你说的文章中，如果为了得到HEK293/kB-luc细胞株，我觉得共转的目的有两个1为增加筛选抗性2通过GFP检测转染效率，优化筛选，因为只有检测到GFP的细胞株才可能得到稳转株。后面的共转看你的描述我也不太清楚~你能否在说详细一点。
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2楼2011-04-28 17:35:01
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董珍珍

新虫 (小有名气)
那如果转染萤火虫荧光素酶报告基因同时共转染海肾荧光素酶内参质粒，也需要设立阳性对照，阴性对照和实验组吗？谢谢。
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勤能补拙，熟能生巧！
4楼2011-04-28 20:24:50
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励热心交流 2011-04-29 08:43:13
引用回帖:
Originally posted by 董珍珍 at 2011-04-28 20:24:50:
那如果转染萤火虫荧光素酶报告基因同时共转染海肾荧光素酶内参质粒，也需要设立阳性对照，阴性对照和实验组吗？谢谢。

如果你筛稳转株的话可以只转lucifase
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5楼2011-04-28 21:44:05
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