应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关稳转NF-kB萤光素酶报告基因的问题
51/1返回列表
查看: 2942  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

董珍珍

新虫 (小有名气)

[求助] 有关稳转NF-kB萤光素酶报告基因的问题

在一本书上看到过这样几句话：“用脂质转染法将pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP（筛选用）以及pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293，加入G418，......选择筛选和维持筛选分别历时4周和6周，已获得稳定转染的HEK293/kB-luc细胞株，扩增HEK293/kB-luc细胞2至3代用于实验。”我不懂作者把pElam-kB-luc质粒和pcDAN3.1-GFP共转染细胞的目的，那个pcDAN3.1-GFP是用来做内参的？好像不是，我不是很理解。另外作者为什么又把pcDAN3.1质粒和pcDAN3.1-GFP质粒共转染HEK293细胞呢？还请老师指点。非常感谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
勤能补拙，熟能生巧！
1楼 2011-04-28 16:34:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励热心交流 2011-04-29 08:43:13
引用回帖:
Originally posted by 董珍珍 at 2011-04-28 20:24:50:
那如果转染萤火虫荧光素酶报告基因同时共转染海肾荧光素酶内参质粒，也需要设立阳性对照，阴性对照和实验组吗？谢谢。

如果你筛稳转株的话可以只转lucifase
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-28 21:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 2011-04-28 19:00:52
我看到你这个，我才发现你之前的帖子我理解错了。这种共转染筛选是可以的，但是我个人觉得假阳性比较高，还是单转比较好，但是涉及到报告基因时，这种方法要更方便。你说的文章中，如果为了得到HEK293/kB-luc细胞株，我觉得共转的目的有两个1为增加筛选抗性2通过GFP检测转染效率，优化筛选，因为只有检测到GFP的细胞株才可能得到稳转株。后面的共转看你的描述我也不太清楚~你能否在说详细一点。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-04-28 17:35:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 连续鼓励 2011-04-28 19:01:21
董珍珍(金币+5): 感谢！ 2011-04-28 20:09:34
一般共转染要设立3组，包括阳性对照、阴性对照和实验组。阳性对照是指仅转染有抗性基因的质粒组，阴性对照指仅转染有目的基因的质粒组，实验组指共同转染两种质粒的组。实验组两种质粒要有一个合适的比例，一般来讲抗性质粒：构建质粒=1：10。一般来说是筛选质粒要比构建质粒多。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-28 17:37:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董珍珍

新虫 (小有名气)
那如果转染萤火虫荧光素酶报告基因同时共转染海肾荧光素酶内参质粒，也需要设立阳性对照，阴性对照和实验组吗？谢谢。
赞一下 回复此楼
勤能补拙，熟能生巧！
4楼2011-04-28 20:24:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 73/3650 2026-08-16 20:47 by yq199112088
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭