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ikaren2013

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】脂质体稳定转染问题请教！

脂质体转染乳腺癌细胞MCF-7。稳定转染。
筛选了快一个月了，孔板里的剩下的细胞圆圆的，亮亮的，也没见成团生长，没见增多，没见上清中飘着多少死细胞。但孔板背景很脏，虽然在每3天换一次液。
请问这样的细胞状态到底是怎么回事啊？好心人给指点一下吧，跪谢！
PS:因转染的质粒带有GFP，看过荧光显微镜，有的细胞还是带有绿色荧光的，比较弱。

[ Last edited by ikaren2013 on 2010-8-31 at 22:36 ]
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1楼 2010-08-31 22:33:53
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

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优秀版主
★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
抗生素的浓度没整好，这个是需要做梯度的
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2楼2010-09-01 08:28:34
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xudankuaile

新虫 (小有名气)
★ ★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):鼓励交流~· 2010-10-12 09:44:22
个人认为是筛选的时候浓度太低，筛选时间太长所致，持续长时间的用G418筛选，细胞就长不起来了，尽管你已经筛选出了单克隆。重新做吧，我的细胞之前也是这样子。
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3楼2010-10-12 09:41:01
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playboy723

金虫 (正式写手)
★
ikaren2013(金币+1):谢谢参与
重新做抗药浓度的筛选吧   或者加大抗生素浓度   筛到活细胞全部是带荧光时为止
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4楼2010-10-12 11:16:54
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