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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】G418筛选稳定转染
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chen860729

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】G418筛选稳定转染 已有5人参与

转染pEGFP-N1载体，然后用G418筛选，筛选很长时间，细胞没有死亡，但是没有表达绿色荧光。pEGFP-N1载体能整合到真核细胞的染色体上吗？
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1楼 2010-10-04 14:40:21
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:37
引用回帖:
Originally posted by chen860729 at 2010-10-05 15:18:07:

用的是脂质体转染的，能整合到染色体上吗？

方法自然是正确的，也是很多人做过的。但不代表一定对你的case能够合适。
LZ检查一下整个实验过程，可能在哪个地方出现了纰漏
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7楼2010-10-06 08:24:12
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不一定的，看你的同源的效果了
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2楼2010-10-04 16:16:30
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虫子火箭兵

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:16
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能，先设一个筛选浓度的梯度，看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长，就用那个浓度筛选
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3楼2010-10-04 17:58:53
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我本兽医

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-10-06 08:35:26
我也做稳定筛选方面的实验，也遇到了您所说的问题，已经持续快一年了，始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体，最好还是要尝试一下病毒载体。
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4楼2010-10-04 22:54:13
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