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chen860729

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】G418筛选稳定转染已有5人参与

转染pEGFP-N1载体,然后用G418筛选,筛选很长时间,细胞没有死亡,但是没有表达绿色荧光。pEGFP-N1载体能整合到真核细胞的染色体上吗?
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chen860729

新虫 (初入文坛)

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Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-10-04 17:58:53:
在筛选剂条件下细胞有逃逸的可能,先设一个筛选浓度的梯度,看看对照组细胞在什么浓度下完全不生长,就用那个浓度筛选

我们用的浓度是对照组的细胞在六天到七天全部死亡,这个浓度可以吗?
5楼2010-10-05 15:15:59
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chen860729

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by lwiaanngg at 2010-10-04 16:16:30:
不一定的,看你的同源的效果了

用的是脂质体转染的,能整合到染色体上吗?
6楼2010-10-05 15:18:07
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chen860729

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 我本兽医 at 2010-10-04 22:54:13:
我也做稳定筛选方面的实验,也遇到了您所说的问题,已经持续快一年了,始终不行。建议你不要完全信任真核表达载体,最好还是要尝试一下病毒载体。

请问你知道这是什么原因吗?我们筛选的细胞都十几天了,没有死,但是也观察不到荧光
8楼2010-10-06 21:28:48
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