应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » CHO细胞中，G418加压筛选与DHFR系统加压筛选的区别？
161/2返回列表12下一页
查看: 3539  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主

[求助] CHO细胞中，G418加压筛选与DHFR系统加压筛选的区别？

最近在做CHO细胞的加压筛选，有几个问题想请教。
1、G418筛选和MTX的DHFR系统筛选有什么区别？
查到的文献是这么说的：
“DHFR基因连同其附近几千KB的DNA还会扩增以满足核苷酸合成的需要”
那么，G418加压筛选是什么原理？也能够使转染基因的拷贝数增加吗？

2、加压筛选的具体步骤是怎么样的？
a、将载体转化CHO细胞后，直接铺板筛选单克隆，至每一个well中有一个细胞。
然后再拿这个细胞扩大培养继续单克隆筛选。
B、将载体转化CHO细胞后，分成若干等份（多克隆）培养，逐步对这些等份的多克隆加压。
通过多次加压后，最后一步再进行单克隆化
到底是那种策略呢？（ a 还是B）

3、已经整合到基因组上的基因还能够通过加压来增加拷贝数吗？（G418 or MTX）
那这个加压是什么原理？貌似跟1重复了
回复此楼

» 猜你喜欢
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
1楼 2013-11-27 11:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
houjinglhy: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！可能我问题没提清楚 我是想问NEO基因和DHFR基因整合到基因组上后是否能够再通过加压扩增 2013-11-27 15:12:41
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-11-27 16:01:41
1.g418筛选是通过NEO基因来实现的，一般CHO本身都不带G418抗性，通过转染将带有目的基因和NEO基因的质粒转染到细胞内，就使细胞带有抗性了，在通过筛选就能获取表达目的基因的细胞。DHFR缺陷型CHO是人为改造的，没有二氢叶酸还原酶，转染加入带有DHFR基因就可以用MTX筛选，所以DHFR的CHO也可以用G418 筛选。
2.加压筛选前首先要用G418筛选CHO本身的最大抑制浓度，转染后再用最大抑制浓度的G418筛选，经过一定的周期就会得到具有G418抗性的细胞，要得到表达稳定的单克隆细胞株还要采用极限稀释的手段。
3.已经整合的基因在传代过程中，有一定程度的会丢失，所以只要不表达蛋白，一般传代都加上筛选压力，保持细胞的稳定性
赞一下 回复此楼
2楼2013-11-27 13:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
houjinglhy: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 已经整合到基因组上的DHFR基因还能扩增？这个是什么原理呢？ 2013-11-27 15:09:59
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-11-27 16:01:48
G418不能提高拷贝数，只能筛选含有NEO基因的细胞，将无NEO基因的细胞杀死，DHFR通过浓度的加压，带动两侧的基因扩增，但是在DHRF缺陷的细胞才能使用，上述两种筛选都需要挑选稳定细胞克隆，建立细胞系，并且需要确定细胞系在无压力或低压力的条件下稳定表达目的基因
赞一下 回复此楼
3楼2013-11-27 13:18:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pypsak

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-27 16:01:52
本帖内容被屏蔽
4楼2013-11-27 14:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
引用回帖:
4楼: Originally posted by pypsak at 2013-11-27 14:50:37
现在有一个新技术，在CHO细胞的高表达位点整合上目的基因，而且可以多拷贝，整合数量在8个位点左右，而且在50代内，基因不会丢失，再配合上DHFR加压筛选，能使表达量又上升几倍。

定点整合多拷贝的新技术 有没有商业化 能否告知一下？
赞一下 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
5楼2013-11-27 15:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pypsak

金虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-11-27 15:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
引用回帖:
6楼: Originally posted by pypsak at 2013-11-27 15:52:41
已经有了

flp-in ？
回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
7楼2013-11-27 16:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pypsak

金虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-11-27 16:54:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houjinglhy

荣誉版主 (文坛精英)

表达自由，人权之基。

优秀版主
引用回帖:
8楼: Originally posted by pypsak at 2013-11-27 16:54:00
不是，这个效率太低了

是否可以供商品名？
赞一下 回复此楼
从小就学习鲁迅，直到现在才体会到他当时是多么的绝望和无助，却仍要用尽最后一丝力气声嘶力竭的呐喊！
9楼2013-11-27 17:14:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pypsak

金虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
10楼2013-11-27 18:21:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 houjinglhy 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 12/600 2026-03-01 22:10 by 海嵙Y
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭