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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒不表达 已有3人参与

本来表达的重组质粒,仅仅是又添加了一个小标签,然后就不表达,请教可能的原因
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为梦想而努力!
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miao1991

新虫 (初入文坛)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:28
本帖内容被屏蔽

2楼2014-06-02 12:37:00
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
添加了个什么标签,添加位置是否正确
大家相互帮助哈
3楼2014-06-02 12:46:21
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 12:46:21
添加了个什么标签,添加位置是否正确

生物素标签,读码框没问题,测序位置正确
为梦想而努力!
4楼2014-06-02 14:38:07
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by diqilvyinyun at 2014-06-02 14:38:07
生物素标签,读码框没问题,测序位置正确...

你是如果验证蛋白不表达的,sds-page目的大小没蛋白了?而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗?
大家相互帮助哈
5楼2014-06-02 16:11:23
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王小七wq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:33
我也是碰到这种情况,测序结果正确就是不表达蛋白;我的是融合蛋白中荧光蛋白表达,目的不表达,很是郁闷。有人建议我换质粒,你参考一下;
但是我们实验室有人碰到过这样的情况,同样的蛋白做WB,刚开始用目的蛋白的一抗,蛋白分子量位置不对,但换成标签蛋白的一抗,蛋白分子量位置正确。
6楼2014-06-02 21:00:41
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 16:11:23
你是如果验证蛋白不表达的,sds-page目的大小没蛋白了?而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗?...

谢谢指导
为梦想而努力!
7楼2014-06-03 10:05:22
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bolysu

禁虫 (著名写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

8楼2014-06-03 10:37:31
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by bolysu at 2014-06-03 10:37:31
应该是你添加的序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构,导致翻译不能进行

怎么查看RBS?如何知道是否插入序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构?急求,在线等,谢谢
为梦想而努力!
9楼2014-06-03 18:55:54
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roomofxw

木虫 (正式写手)

如果之前能表达,且不是包涵体,加了标签反而不表达
建议将这段切下来重新做载体构建一遍
测序能看到的地方,只是质粒的一小部分
10楼2014-06-04 08:57:32
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