应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
111/2返回列表12下一页
查看: 5120  |  回复: 10
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

guduyiyu

金虫 (正式写手)

[求助] pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别已有4人参与

大神们，最近在做原核表达载体构建，以及表达条件的筛选，用到了两种载体，pET-28a与pGEX-4T-1，蛋白是胞内蛋白，这两种载体有什么区别吗，哪一个作为表达载体更好一些？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
不努力永远不知道自己有多优秀
1楼2014-04-24 19:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoamuchong

专家顾问 (职业作家)

科研工作者

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+2 2014-04-24 21:26:57
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也决定了它的缺点，就是不能控制在何时表达某个基因，后者的优点就是可以控制表达的时间，但是需要诱导物。哪个更好的话，得看用途了。
赞一下(3人) 回复此楼
曾经有人问我为什么要学微生物，我只是想离生命的本质更近一点。
2楼2014-04-24 19:51:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

guduyiyu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoamuchong at 2014-04-24 19:51:04
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也 ...

首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么
赞一下 回复此楼
不努力永远不知道自己有多优秀
3楼2014-04-27 16:37:33
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-04-27 16:37:33
首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么...

你好，我也在做原核表达载体构建，想请教一下我现在知道目的基因的CDS序列，设计引物的时候应该是根据ORF设计吗？还有就是pET-22,28,30,32这几个表达载体应该怎么选择尼？你们做的时候是手头有哪个用哪个嘛？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-05-01 11:02:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xavier1989

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

标签不同，GEX是用GST标签纯化，PET系列没记错是HIS。
我自己表达的情况来看，GST标签纯化的蛋白相对杂带少一点
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-01 12:27:19
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

872940890

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pgex表达后 获得可溶性蛋白的概率大一些
赞一下 回复此楼
我知道我得继续努力！加油！
6楼2014-05-01 19:13:23
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guduyiyu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lihuahan at 2014-05-01 11:02:48
你好，我也在做原核表达载体构建，想请教一下我现在知道目的基因的CDS序列，设计引物的时候应该是根据ORF设计吗？还有就是pET-22,28,30,32这几个表达载体应该怎么选择尼？你们做的时候是手头有哪个用哪个嘛？
...

不是吧，ORF不是开放式阅读框吗，这不是蛋白表达时才才用的东西吗，设计引物要在多克隆位点设计，目的片段要插入到多克隆位点啊，我在选择载体上没有绝对的标准啊，我现在用的就是PET-28，我是没有一个选择的依据吧，其实这个问题也困扰着我，同样也想请大神指点一下，共同进步
赞一下 回复此楼
不努力永远不知道自己有多优秀
7楼2014-05-03 13:32:07
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-05-03 13:32:07
不是吧，ORF不是开放式阅读框吗，这不是蛋白表达时才才用的东西吗，设计引物要在多克隆位点设计，目的片段要插入到多克隆位点啊，我在选择载体上没有绝对的标准啊，我现在用的就是PET-28，我是没有一个选择的依据吧 ...

恩恩，1.因为我后期是要做蛋白纯化的，是不是就应该根据ORF设计引物尼？还是把CDS序列告诉公司，直接让他们设计并合成就可以？
2.还有一个问题就是双酶切位点应该怎么选择尼？除了尽量共用缓冲液，目的基因不能含有相同的酶切位点，还有别的跟目的蛋白有关的要求吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2014-05-03 18:36:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-05-03 13:32:07
不是吧，ORF不是开放式阅读框吗，这不是蛋白表达时才才用的东西吗，设计引物要在多克隆位点设计，目的片段要插入到多克隆位点啊，我在选择载体上没有绝对的标准啊，我现在用的就是PET-28，我是没有一个选择的依据吧 ...

关于第一个问题，现在有cDNA的第一链，想直接设计并合成两端带有酶切位点的引物，直接合成两端带有酶切位点的目的基因~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2014-05-03 18:40:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)
pGEX-4T-1,楼主有这个质粒吗？能送我一些吗？邮费我自己出就好了，谢谢。
赞一下 回复此楼
采菊东篱下，悠然见南山。
10楼2015-03-16 16:38:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guduyiyu 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭