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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
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guduyiyu

金虫 (正式写手)

[求助] pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别已有4人参与

大神们，最近在做原核表达载体构建，以及表达条件的筛选，用到了两种载体，pET-28a与pGEX-4T-1，蛋白是胞内蛋白，这两种载体有什么区别吗，哪一个作为表达载体更好一些？
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不努力永远不知道自己有多优秀
1楼2014-04-24 19:12:47
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-04-27 16:37:33
首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么...

你好，我也在做原核表达载体构建，想请教一下我现在知道目的基因的CDS序列，设计引物的时候应该是根据ORF设计吗？还有就是pET-22,28,30,32这几个表达载体应该怎么选择尼？你们做的时候是手头有哪个用哪个嘛？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-05-01 11:02:48
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xiaoamuchong

专家顾问 (职业作家)

科研工作者

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+2 2014-04-24 21:26:57
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也决定了它的缺点，就是不能控制在何时表达某个基因，后者的优点就是可以控制表达的时间，但是需要诱导物。哪个更好的话，得看用途了。
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曾经有人问我为什么要学微生物，我只是想离生命的本质更近一点。
2楼2014-04-24 19:51:04
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guduyiyu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoamuchong at 2014-04-24 19:51:04
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也 ...

首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么
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不努力永远不知道自己有多优秀
3楼2014-04-27 16:37:33
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xavier1989

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

标签不同，GEX是用GST标签纯化，PET系列没记错是HIS。
我自己表达的情况来看，GST标签纯化的蛋白相对杂带少一点
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5楼2014-05-01 12:27:19
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