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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别
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guduyiyu

金虫 (正式写手)

[求助] pET-28a与pGEX-4T-1表达蛋白的区别 已有4人参与

大神们，最近在做原核表达载体构建，以及表达条件的筛选，用到了两种载体，pET-28a与pGEX-4T-1，蛋白是胞内蛋白，这两种载体有什么区别吗，哪一个作为表达载体更好一些？
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不努力永远不知道自己有多优秀
1楼 2014-04-24 19:12:47
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-05-03 13:32:07
不是吧，ORF不是开放式阅读框吗，这不是蛋白表达时才才用的东西吗，设计引物要在多克隆位点设计，目的片段要插入到多克隆位点啊，我在选择载体上没有绝对的标准啊，我现在用的就是PET-28，我是没有一个选择的依据吧 ...

恩恩，1.因为我后期是要做蛋白纯化的，是不是就应该根据ORF设计引物尼？还是把CDS序列告诉公司，直接让他们设计并合成就可以？
2.还有一个问题就是双酶切位点应该怎么选择尼？除了尽量共用缓冲液，目的基因不能含有相同的酶切位点，还有别的跟目的蛋白有关的要求吗？

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8楼2014-05-03 18:36:44
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xiaoamuchong

专家顾问 (职业作家)

科研工作者

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dllchina: 金币+2 2014-04-24 21:26:57
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也决定了它的缺点，就是不能控制在何时表达某个基因，后者的优点就是可以控制表达的时间，但是需要诱导物。哪个更好的话，得看用途了。
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曾经有人问我为什么要学微生物，我只是想离生命的本质更近一点。
2楼2014-04-24 19:51:04
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guduyiyu

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiaoamuchong at 2014-04-24 19:51:04
类型和抗性不一样。pET-28a为组成型，抗kana，pGEX-4T-1为诱导型，抗Ampicillin。前者可以不经诱导组成型表达某个基因，后者在经过诱导物的诱导后才能表达某个基因；前者的优点就是不要诱导可以一直稳定的表达，这也 ...

首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么
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不努力永远不知道自己有多优秀
3楼2014-04-27 16:37:33
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lihuahan

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by guduyiyu at 2014-04-27 16:37:33
首先谢谢你啊，但是我现在用pET-28a作载体，导入宿主菌后，做外源表达时，也要经过IPTG的诱导啊，不诱导的话，蛋白表达水平特别的低，你所说的诱导是在表达外源蛋白时吗？还是别的什么...

你好，我也在做原核表达载体构建，想请教一下我现在知道目的基因的CDS序列，设计引物的时候应该是根据ORF设计吗？还有就是pET-22,28,30,32这几个表达载体应该怎么选择尼？你们做的时候是手头有哪个用哪个嘛？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2014-05-01 11:02:48
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