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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化后不长菌落或不表达！
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screen83

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后不长菌落或不表达！

求助各位高手：
       本人将携带淀粉酶基因的载体通过电转化导入短小芽孢杆菌后，涂布新霉素抗性平板，发现不长菌落，重新制备感受态细胞，长菌落，但是不表达！质粒是放在-80度保存的，没导入大肠杆菌中，会是质粒放置时间长，失效了吗？还是电转设备问题那！请各位虫友帮助想想办法！不胜感激啊！
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1楼 2012-08-23 09:22:57
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，七夕快乐 2012-08-23 15:50:12
首先，能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次，你重新制备感受态转化前后这两次，你都要确定你的质粒有没有转进去（和空白作对照或提质粒）。如果转进去了，表达不成功，那你要看看你诱导表达的条件是否合适。望楼主好运
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只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-08-23 09:28:12
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screen83

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-08-23 09:28:12
首先，能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次，你重新制备感受态转化前后这两次，你都要确定你的质粒有没有转进去（和空白作对照或提质粒）。如果转进去了，表达不成功，那你要看看你诱导表达的条件 ...

多谢指教！我再好好琢磨一下！谢谢了！
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3楼2012-08-23 09:42:16
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windsor2011

银虫 (小有名气)
4楼2012-08-23 10:18:42
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助，七夕快乐 2012-08-23 15:50:27
感觉是你的质粒没有转进去。转化的时候要同一批感受态细胞做对照的，如果对照长了，转了质粒的没长，那就是没转进去；如果两个都没长那就是你的感受态制备的有问题。加油
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选中一个目标，坚持不懈的走下去！
5楼2012-08-23 11:39:18
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