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screen83

新虫 (初入文坛)

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[求助] 转化后不长菌落或不表达！

求助各位高手：
本人将携带淀粉酶基因的载体通过电转化导入短小芽孢杆菌后，涂布新霉素抗性平板，发现不长菌落，重新制备感受态细胞，长菌落，但是不表达！质粒是放在-80度保存的，没导入大肠杆菌中，会是质粒放置时间长，失效了吗？还是电转设备问题那！请各位虫友帮助想想办法！不胜感激啊！

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1楼 2012-08-23 09:22:57

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windsor2011

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助，七夕快乐 2012-08-23 15:50:12

首先，能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次，你重新制备感受态转化前后这两次，你都要确定你的质粒有没有转进去（和空白作对照或提质粒）。如果转进去了，表达不成功，那你要看看你诱导表达的条件是否合适。望楼主好运

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只要功夫深铁杵磨成针

2楼2012-08-23 09:28:12

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screen83

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-08-23 09:28:12
首先，能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次，你重新制备感受态转化前后这两次，你都要确定你的质粒有没有转进去（和空白作对照或提质粒）。如果转进去了，表达不成功，那你要看看你诱导表达的条件 ...

多谢指教！我再好好琢磨一下！谢谢了！

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3楼2012-08-23 09:42:16

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