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screen83

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化后不长菌落或不表达!

求助各位高手:
       本人将携带淀粉酶基因的载体通过电转化导入短小芽孢杆菌后,涂布新霉素抗性平板,发现不长菌落,重新制备感受态细胞,长菌落,但是不表达!质粒是放在-80度保存的,没导入大肠杆菌中,会是质粒放置时间长,失效了吗?还是电转设备问题那!请各位虫友帮助想想办法!不胜感激啊!
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助,七夕快乐 2012-08-23 15:50:12
首先,能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次,你重新制备感受态转化前后这两次,你都要确定你的质粒有没有转进去(和空白作对照或提质粒)。如果转进去了,表达不成功,那你要看看你诱导表达的条件是否合适。望楼主好运
只要功夫深铁杵磨成针
2楼2012-08-23 09:28:12
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screen83

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by windsor2011 at 2012-08-23 09:28:12
首先,能帮你确认质粒放在-80度保存拿出来用是没问题的。其次,你重新制备感受态转化前后这两次,你都要确定你的质粒有没有转进去(和空白作对照或提质粒)。如果转进去了,表达不成功,那你要看看你诱导表达的条件 ...

多谢指教!我再好好琢磨一下!谢谢了!
3楼2012-08-23 09:42:16
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windsor2011

银虫 (小有名气)

4楼2012-08-23 10:18:42
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冰雨@@雾晴

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助,七夕快乐 2012-08-23 15:50:27
感觉是你的质粒没有转进去。转化的时候要同一批感受态细胞做对照的,如果对照长了,转了质粒的没长,那就是没转进去;如果两个都没长那就是你的感受态制备的有问题。加油
选中一个目标,坚持不懈的走下去!
5楼2012-08-23 11:39:18
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