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有没有哪位大虾做过重组质粒在细胞膜表达？
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前段时间刚做完质粒构建，迫不及待转染进细胞看一下，转染的是CHO细胞，转然后培养了大概48个小时，目的基因是在细胞膜表达的，转染后做了一个细胞免疫荧光，拍下图片发现除了细胞核没有染色外，细胞质细胞膜都染色了，而且细胞膜结构也看的不是很清楚，想问问各位大虾： 1、是我的质粒有问题导致细胞质染色还是转染质粒后就会这样？ 2、如何才能让在细胞膜表达的基因转染后只在CHO细胞膜表达？ PS:如果有这方面的文献求发来参考下哈。  1.jpg  2.jpg [ Last edited by sars37 on 2013-11-4 at 21:00 ] |
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2楼2013-11-05 09:22:37
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【答案】应助回帖
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呵呵。你这个问题太高深了。表达出蛋白就不是很容易了。而特定位置那和表达关系不大。是转运装配问题了。 涉及这里面通路的各种孔道蛋白和跨膜蛋白的转运。 。 无论是否异体还是原味表达。基因表达出的蛋白要想到达特定位置，得有负责转运他的特异性孔道蛋白，如果要出膜，那就需要负责定位和转运的跨膜蛋白，而且是特异性的。这和抗原抗体等结构匹配性是类同的。 原核的蛋白表达应该比真核简单。我们做的就是原核的表达，但是我们要得到特异位置表达的蛋白还真没发现这个技术。如果你是要得到膜上的蛋白。可以加点帮助转运的核苷酸或者标签试试。能帮助转运到膜上。这个东西搜搜就有很多因为做的东西不是细胞。我没把握是否是这样弄，但是原理是这样的。 |
3楼2013-11-05 12:54:28
4楼2013-11-05 16:38:18
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5楼2013-11-05 17:19:26
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