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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 有没有哪位大虾做过重组质粒在细胞膜表达?

前段时间刚做完质粒构建,迫不及待转染进细胞看一下,转染的是CHO细胞,转然后培养了大概48个小时,目的基因是在细胞膜表达的,转染后做了一个细胞免疫荧光,拍下图片发现除了细胞核没有染色外,细胞质细胞膜都染色了,而且细胞膜结构也看的不是很清楚,想问问各位大虾:
1、是我的质粒有问题导致细胞质染色还是转染质粒后就会这样?
2、如何才能让在细胞膜表达的基因转染后只在CHO细胞膜表达?
PS:如果有这方面的文献求发来参考下哈。
有没有哪位大虾做过重组质粒在细胞膜表达?
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有没有哪位大虾做过重组质粒在细胞膜表达?-1
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[ Last edited by sars37 on 2013-11-4 at 21:00 ]
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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sars37: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-05 20:09:51
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-06 00:55:16
呵呵。你这个问题太高深了。表达出蛋白就不是很容易了。而特定位置那和表达关系不大。是转运装配问题了。
涉及这里面通路的各种孔道蛋白和跨膜蛋白的转运。

无论是否异体还是原味表达。基因表达出的蛋白要想到达特定位置,得有负责转运他的特异性孔道蛋白,如果要出膜,那就需要负责定位和转运的跨膜蛋白,而且是特异性的。这和抗原抗体等结构匹配性是类同的。

原核的蛋白表达应该比真核简单。我们做的就是原核的表达,但是我们要得到特异位置表达的蛋白还真没发现这个技术。如果你是要得到膜上的蛋白。可以加点帮助转运的核苷酸或者标签试试。能帮助转运到膜上。这个东西搜搜就有很多因为做的东西不是细胞。我没把握是否是这样弄,但是原理是这样的。
应助之星就是我~没错。你没有看错~
3楼2013-11-05 12:54:28
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-05 12:54:28
呵呵。你这个问题太高深了。表达出蛋白就不是很容易了。而特定位置那和表达关系不大。是转运装配问题了。
涉及这里面通路的各种孔道蛋白和跨膜蛋白的转运。

无论是否异体还是原味表达。基因表达出的蛋白要想到 ...

你好,我转染的就是水通道蛋白的基因,也需要孔道蛋白的转运吗
4楼2013-11-05 16:38:18
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sars37 at 2013-11-05 16:38:18
你好,我转染的就是水通道蛋白的基因,也需要孔道蛋白的转运吗...

晕。水孔蛋白种类那么多。分布问题我真心不好回答了。你可以查查你表达的分子在细胞器中的分布是不是有特异性。我的理解是不一定就局限在细胞膜上,细胞器膜上也会有。你看看水孔蛋白的表达吧。文献太多了。
应助之星就是我~没错。你没有看错~
5楼2013-11-05 17:19:26
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sars37 at 2013-11-05 16:38:18
你好,我转染的就是水通道蛋白的基因,也需要孔道蛋白的转运吗...

就搜水通道蛋白表达,文献很多的
应助之星就是我~没错。你没有看错~
6楼2013-11-05 21:10:13
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