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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教各位大虾，质粒转化，挑菌摇不起来的原因？如何解决？
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sarah-miao

银虫 (正式写手)

[求助] 请教各位大虾，质粒转化，挑菌摇不起来的原因？如何解决？

阳性质粒“库存”紧张，转化全式金trans5感受态，均正常操作，涂板有菌落，挑单个菌落摇菌14h仍无很浑浊状态，麻烦各位指教是什么原因，如何解决呢？
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1楼 2013-03-02 15:41:54
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lishaohe

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sarah-miao: 金币+5, ★有帮助 2013-03-04 15:49:25
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 19:20:10
很有可能是假阳性，因此再接到含有抗生素的培养基中就不长，只有重新转化，或者换一种感受态再转化。这种情况一般再挑，再摇也不会浑浊的。
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2楼2013-03-02 15:49:32
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普通回帖

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考虑下你们配的培养基 抗生素是不是加多了，可以做个阳性对照
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3楼2013-03-02 19:48:18
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
转化质粒的时候做负对照了没有？这种情况看多半是假阳性了，除非是摇菌的恒温箱温度坏了。
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4楼2013-03-03 01:38:44
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by peakg7 at 2013-03-02 19:48:18
考虑下你们配的培养基 抗生素是不是加多了，可以做个阳性对照

抗生素没有问题，大家都用的
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5楼2013-03-04 15:49:49
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-03 01:38:44
转化质粒的时候做负对照了没有？这种情况看多半是假阳性了，除非是摇菌的恒温箱温度坏了。

嗯嗯，我有试着重新转化其他品种的感受态，结果长起来了
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6楼2013-03-04 15:50:27
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lishaohe at 2013-03-02 15:49:32
很有可能是假阳性，因此再接到含有抗生素的培养基中就不长，只有重新转化，或者换一种感受态再转化。这种情况一般再挑，再摇也不会浑浊的。

嗯嗯，重新转化其他品种的感受态，然后摇起来了，谢谢啊，另外，请问下，所谓的假阳性为什么会出现啊
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7楼2013-03-04 15:51:15
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lishaohe

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

假阳性出现的原因我也不是太清楚。呵呵！
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8楼2013-03-04 20:34:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-29 19:20:26
出现假阳性有几种可能。一个是抗性板子上的抗生素部分失效，筛选压力不够。出现这种情况有可能是配置抗生素平板的时候培养基温度过高或者是抗生素母液本身部分失效了。还有就是制备的感受态细胞污染了具有抗性的杂菌。
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9楼2013-03-05 07:44:16
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sarah-miao

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-05 07:44:16
出现假阳性有几种可能。一个是抗性板子上的抗生素部分失效，筛选压力不够。出现这种情况有可能是配置抗生素平板的时候培养基温度过高或者是抗生素母液本身部分失效了。还有就是制备的感受态细胞污染了具有抗性的杂菌 ...

噢噢噢，谢谢啦，我回头换感受态重新做了一遍呢，谢谢你啊
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10楼2013-03-08 14:32:43
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