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1楼2014-06-02 09:06:38

miao1991

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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:28

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2楼2014-06-02 12:37:00

luwei13566

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3楼2014-06-02 12:46:21

diqilvyinyun

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3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 12:46:21
添加了个什么标签，添加位置是否正确

生物素标签，读码框没问题，测序位置正确

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4楼2014-06-02 14:38:07

luwei13566

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4楼: Originally posted by diqilvyinyun at 2014-06-02 14:38:07
生物素标签，读码框没问题，测序位置正确...

你是如果验证蛋白不表达的，sds-page目的大小没蛋白了？而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗？

大家相互帮助哈

5楼2014-06-02 16:11:23

王小七wq

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kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:33

我也是碰到这种情况，测序结果正确就是不表达蛋白；我的是融合蛋白中荧光蛋白表达，目的不表达，很是郁闷。有人建议我换质粒，你参考一下；
但是我们实验室有人碰到过这样的情况，同样的蛋白做WB，刚开始用目的蛋白的一抗，蛋白分子量位置不对，但换成标签蛋白的一抗，蛋白分子量位置正确。

6楼2014-06-02 21:00:41

diqilvyinyun

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5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 16:11:23
你是如果验证蛋白不表达的，sds-page目的大小没蛋白了？而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗？...

谢谢指导

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7楼2014-06-03 10:05:22

bolysu

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8楼2014-06-03 10:37:31

diqilvyinyun

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8楼: Originally posted by bolysu at 2014-06-03 10:37:31
应该是你添加的序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构，导致翻译不能进行

怎么查看RBS？如何知道是否插入序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构？急求，在线等，谢谢

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9楼2014-06-03 18:55:54

roomofxw

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如果之前能表达，且不是包涵体，加了标签反而不表达
建议将这段切下来重新做载体构建一遍
测序能看到的地方，只是质粒的一小部分

10楼2014-06-04 08:57:32