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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒不表达
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒不表达 已有3人参与

本来表达的重组质粒，仅仅是又添加了一个小标签，然后就不表达，请教可能的原因
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为梦想而努力！
1楼 2014-06-02 09:06:38
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miao1991

新虫 (初入文坛)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:28
本帖内容被屏蔽
2楼2014-06-02 12:37:00
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
添加了个什么标签，添加位置是否正确
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大家相互帮助哈
3楼2014-06-02 12:46:21
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 12:46:21
添加了个什么标签，添加位置是否正确

生物素标签，读码框没问题，测序位置正确
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为梦想而努力！
4楼2014-06-02 14:38:07
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luwei13566

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by diqilvyinyun at 2014-06-02 14:38:07
生物素标签，读码框没问题，测序位置正确...

你是如果验证蛋白不表达的，sds-page目的大小没蛋白了？而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗？
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大家相互帮助哈
5楼2014-06-02 16:11:23
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王小七wq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-06-02 22:32:33
我也是碰到这种情况，测序结果正确就是不表达蛋白；我的是融合蛋白中荧光蛋白表达，目的不表达，很是郁闷。有人建议我换质粒，你参考一下；
但是我们实验室有人碰到过这样的情况，同样的蛋白做WB，刚开始用目的蛋白的一抗，蛋白分子量位置不对，但换成标签蛋白的一抗，蛋白分子量位置正确。
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6楼2014-06-02 21:00:41
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 16:11:23
你是如果验证蛋白不表达的，sds-page目的大小没蛋白了？而你以前不加生物素标签sds-page上有条带吗？...

谢谢指导
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为梦想而努力！
7楼2014-06-03 10:05:22
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bolysu

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
8楼2014-06-03 10:37:31
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diqilvyinyun

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bolysu at 2014-06-03 10:37:31
应该是你添加的序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构，导致翻译不能进行

怎么查看RBS？如何知道是否插入序列与载体的RBS位点附近形成稳定二级结构？急求，在线等，谢谢
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为梦想而努力！
9楼2014-06-03 18:55:54
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roomofxw

木虫 (正式写手)
如果之前能表达，且不是包涵体，加了标签反而不表达
建议将这段切下来重新做载体构建一遍
测序能看到的地方，只是质粒的一小部分
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10楼2014-06-04 08:57:32
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