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qinglongwang

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么先使用Trans1-T1转化连接产物,再提取质粒转化到表达细胞里面? 已有2人参与

用全式金载体pEasy-E2转化到大肠杆菌表达,为什么需要先使用Trans1-T1转化连接产物,再提取质粒转化到表达细胞里面?
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
相较于表达细胞,外源序列更易转入Trans1,通过Trans1获得大量重组载体,再转化表达细胞,这样就更容易获得重组表达菌。这和构建植物表达载体时,先转化大肠杆菌,获得阳性菌提取质粒后再转化农杆菌是一样的道理。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-07-23 22:16:53
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qinglongwang

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-07-23 22:16:53
相较于表达细胞,外源序列更易转入Trans1,通过Trans1获得大量重组载体,再转化表达细胞,这样就更容易获得重组表达菌。这和构建植物表达载体时,先转化大肠杆菌,获得阳性菌提取质粒后再转化农杆菌是一样的道理。

谢谢。

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-23 22:47:43
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
大肠杆菌菌株可分为克隆菌株和表达菌株,Trans1-T1就是一个克隆菌株,用来扩增质粒,一般克隆菌株中endA1和RecA1酶都是敲除的,这样使得外源质粒适于在细菌体内复制,而且没有endA1,提出来的质粒不易被降解
你说的表达细胞应该是表达菌株吧,常见的就是BL21,用来表达目的蛋白,BL21的endA1没有敲除,所以不适合从其中提取质粒
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-25 14:50:04
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qinglongwang

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-25 14:50:04
大肠杆菌菌株可分为克隆菌株和表达菌株,Trans1-T1就是一个克隆菌株,用来扩增质粒,一般克隆菌株中endA1和RecA1酶都是敲除的,这样使得外源质粒适于在细菌体内复制,而且没有endA1,提出来的质粒不易被降解
你说的 ...

嗯嗯,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-07-25 16:45:39
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