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qinglongwang

新虫 (小有名气)

[求助] 为什么先使用Trans1-T1转化连接产物，再提取质粒转化到表达细胞里面？ 已有2人参与

用全式金载体pEasy-E2转化到大肠杆菌表达，为什么需要先使用Trans1-T1转化连接产物，再提取质粒转化到表达细胞里面？
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1楼 2014-07-23 19:21:29
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
相较于表达细胞，外源序列更易转入Trans1，通过Trans1获得大量重组载体，再转化表达细胞，这样就更容易获得重组表达菌。这和构建植物表达载体时，先转化大肠杆菌，获得阳性菌提取质粒后再转化农杆菌是一样的道理。
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qinglongwang
2楼2014-07-23 22:16:53
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qinglongwang

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2014-07-23 22:16:53
相较于表达细胞，外源序列更易转入Trans1，通过Trans1获得大量重组载体，再转化表达细胞，这样就更容易获得重组表达菌。这和构建植物表达载体时，先转化大肠杆菌，获得阳性菌提取质粒后再转化农杆菌是一样的道理。

谢谢。

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3楼2014-07-23 22:47:43
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大肠杆菌菌株可分为克隆菌株和表达菌株，Trans1-T1就是一个克隆菌株，用来扩增质粒，一般克隆菌株中endA1和RecA1酶都是敲除的，这样使得外源质粒适于在细菌体内复制，而且没有endA1，提出来的质粒不易被降解
你说的表达细胞应该是表达菌株吧，常见的就是BL21，用来表达目的蛋白，BL21的endA1没有敲除，所以不适合从其中提取质粒
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-25 14:50:04
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qinglongwang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-07-25 14:50:04
大肠杆菌菌株可分为克隆菌株和表达菌株，Trans1-T1就是一个克隆菌株，用来扩增质粒，一般克隆菌株中endA1和RecA1酶都是敲除的，这样使得外源质粒适于在细菌体内复制，而且没有endA1，提出来的质粒不易被降解
你说的 ...

嗯嗯，谢谢

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5楼2014-07-25 16:45:39
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