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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化后涂板问题
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塞外雨

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】转化后涂板问题 已有7人参与

发现转化后，摇2个小时，涂板，过2-3个小时平板干了以后，一层白色的菌体。感受态是同一批，上周做还没事。其他步骤和试剂也没有换。
为什么？
现在一个板涂120微升也这样，之前涂300都没事呢。
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1楼 2010-05-14 10:30:02
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-05-14 12:28:04
可能这一次连接转染的效率都太高了，或者是平板抗性有问题，如果是前者，少涂或者划板就好了，如果是后者就要重新制备抗性平板

建议重新制备抗性平板，再做一次
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2楼2010-05-14 10:34:41
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塞外雨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-05-14 10:34:41:
可能这一次连接转染的效率都太高了，或者是平板抗性有问题，如果是前者，少涂或者划板就好了，如果是后者就要重新制备抗性平板

建议重新制备抗性平板，再做一次

已经重复4次了，一天做一遍，越涂越少，可是没啥起色。
之前就是得不到转化子，或者长的转化子验证也不对。
这周突然这样了
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只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
3楼2010-05-14 10:38:59
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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重新做好了～
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4楼2010-05-14 10:52:48
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xiaoboxia

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-14 12:28:19
平板抗性有问题，如果是前者，少涂或者划板就好了，如果是后者就要重新制备抗性平板

加油
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5楼2010-05-14 11:04:59
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xiaoru2010

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 塞外雨 at 2010-05-14 10:30:02:
发现转化后，摇2个小时，涂板，过2-3个小时平板干了以后，一层白色的菌体。感受态是同一批，上周做还没事。其他步骤和试剂也没有换。
为什么？
现在一个板涂120微升也这样，之前涂300都没事呢。

我的是什么都不长了……请问你连接时加了几微升的DNA连接了多久？还有涂板怎么涂？是涂匀就行吗？涂完是不是在超净台半开盖晾干？晾多久？100微升菌液
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6楼2010-05-14 11:08:31
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cqyniu

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-05-14 12:28:28
应该是你的平板的抗生素出问题了，我以前也遇到过，后来用了新的抗生素，就没问题了，正常了。祝你好运
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7楼2010-05-14 11:11:04
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zlf
amisking:严禁纯表情发帖！ 2010-05-14 12:29:13
8楼2010-05-14 11:21:15
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎继续交流！ 2010-05-14 12:29:23
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 11:08:31:

我的是什么都不长了……请问你连接时加了几微升的DNA连接了多久？还有涂板怎么涂？是涂匀就行吗？涂完是不是在超净台半开盖晾干？晾多久？100微升菌液

我试过彻底涂干，和涂匀正放半小时后倒置这两种方法，感觉前者浪费一点时间，但是效果比后者好。为了节省时间，制备平板的时候，稍微晾干点，但也不能太干，防止培养时会干裂
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9楼2010-05-14 12:23:00
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塞外雨

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaoru2010 at 2010-05-14 11:08:31:

我的是什么都不长了……请问你连接时加了几微升的DNA连接了多久？还有涂板怎么涂？是涂匀就行吗？涂完是不是在超净台半开盖晾干？晾多久？100微升菌液

连接比例按照回收后两者的浓度和片段大小计算的，你在网上查一下，能查到计算公式。
过夜连接，使用的宝生物的。涂板就加一定量转化后菌液，直接涂，涂匀，培养箱正放之干，倒置。
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10楼2010-05-14 13:57:06
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