24小时热门版块排行榜    

查看: 4457  |  回复: 16

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR有杂带 已有5人参与

各位大虾,下面是我菌落PCR电泳检测的结果,主带是我的目的条带,但是这次PCR结果基本都有较明显的杂带,是我PCR操作的问题,还是其他什么原因呢?还有就是这样的菌液送测序,结果不好吗?

菌落PCR有杂带
2014.4.15-18s.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

越努力越幸运
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是退火温度低了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-15 18:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-04-15 20:50:34
非特异性片段,有时提高退火温度会有作用。。。
还有,可能污染杂菌。。。
另外,需要正对照,这样可以比较。。。
3楼2014-04-15 18:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

David勇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-04-15 20:50:40
用的引物是通用引物吗?是不是挑克隆的时候无然杂菌,或者不是单克隆,有很多原因的,退火温度也可以高点试下。以前有没有做出过没有杂带的情况?
4楼2014-04-15 19:56:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 18:21:56
是不是退火温度低了?

退火温度跟平时做PCR时一样的,您的意思是这只是单纯的非特异性扩增?
越努力越幸运
5楼2014-04-15 21:09:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by David勇 at 2014-04-15 19:56:52
用的引物是通用引物吗?是不是挑克隆的时候无然杂菌,或者不是单克隆,有很多原因的,退火温度也可以高点试下。以前有没有做出过没有杂带的情况?

是用的我自己的特异性引物,以前做出来的会有一些拖带的情况
越努力越幸运
6楼2014-04-15 21:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-04-15 18:35:15
非特异性片段,有时提高退火温度会有作用。。。
还有,可能污染杂菌。。。
另外,需要正对照,这样可以比较。。。

请问这一步的阳性对照要怎么做呢?
越努力越幸运
7楼2014-04-15 21:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不爱做实验

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 柠檬可乐星 at 2014-04-15 21:15:11
请问这一步的阳性对照要怎么做呢?...

就是把片段作为模版,加0.5-1ul 进行和其他同等条件的PCR扩增。。。
正对照是检验你有没有将目的片段回收回来以及PCR条件是否合适。。。
8楼2014-04-15 22:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 不爱做实验 at 2014-04-15 22:07:59
就是把片段作为模版,加0.5-1ul 进行和其他同等条件的PCR扩增。。。
正对照是检验你有没有将目的片段回收回来以及PCR条件是否合适。。。...

您这里说的“片段”是胶回收的产物吧?
越努力越幸运
9楼2014-04-16 20:50:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星: 金币+2 2014-04-17 10:19:47
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-18 12:35:31
从菌液中扩增得到的结果,已经不错了!有点儿非特异扩增是正常的!

若想改善,方案:
1、提高退火温度。
2、换高退火、特异性高的引物。
3、。。。。。。

如果你的目的只是为了测序,那就不需要研讨条件,直接切胶回收后送测序就可以。
10楼2014-04-16 21:19:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 柠檬可乐星 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见