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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 菌落PCR有杂带 已有5人参与

各位大虾,下面是我菌落PCR电泳检测的结果,主带是我的目的条带,但是这次PCR结果基本都有较明显的杂带,是我PCR操作的问题,还是其他什么原因呢?还有就是这样的菌液送测序,结果不好吗?

菌落PCR有杂带
2014.4.15-18s.png
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不爱做实验

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-04-15 20:50:34
非特异性片段,有时提高退火温度会有作用。。。
还有,可能污染杂菌。。。
另外,需要正对照,这样可以比较。。。
3楼2014-04-15 18:35:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是退火温度低了?

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-15 18:21:56
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David勇

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-04-15 20:50:40
用的引物是通用引物吗?是不是挑克隆的时候无然杂菌,或者不是单克隆,有很多原因的,退火温度也可以高点试下。以前有没有做出过没有杂带的情况?
4楼2014-04-15 19:56:52
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-15 18:21:56
是不是退火温度低了?

退火温度跟平时做PCR时一样的,您的意思是这只是单纯的非特异性扩增?
越努力越幸运
5楼2014-04-15 21:09:46
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