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zzl2516

金虫 (小有名气)

[求助] PCR后电泳问题 已有5人参与

最近一次PCR出现了令人费解的问题,PCR之后的产物跑电泳跑了两次都是没有条带,但是marker很清晰,但是产物用nanodrop测定结果显示浓度是600多ng/μL,而且纯度还挺高。。。。有人遇到过这种情况么。。。这样的情况是P出来还是没P出来啊。。。
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-07 14:45:02
提示:上样缓冲液
2楼2014-04-07 12:14:54
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-07 14:44:47
结论是啥也没有扩增出,至于你检测没有意义的,引物自扩增也有核酸值。基于比色的原理测定DNA的值,即使是蛋白污染,或者盐离子不同也会给出结果的,所以不足为信。
3楼2014-04-07 13:07:09
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-04-07 14:44:53
上个图看看。如果那条道很干净,可能是2楼说的,样没沉到加样孔。如果看得到引物二聚体,那就可能是没p出来哦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
修炼ing,当虫仙……
4楼2014-04-07 14:22:19
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zzl2516(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-07 18:08:42
概念太不清楚了
PCR产物,不纯化,直接测浓度有什么意义?
或者说,如果你测过没有开始P的和P完之后的,如果浓度降低,哈哈,那有可能出产物了。
用光吸收的方法测浓度,根本分不清楚dNTP,或者free-primer,还是你PCR得到的primer dimer, nonspecific bands或者你的产物。
而且,原理上说,dNTP的光吸收最高,这个封闭系统如果P出东西来了,光吸收还应该下降。
5楼2014-04-07 15:12:57
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yuer9809

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
显然没P到目的条带
6楼2014-04-07 15:48:56
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summerliehu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zzl2516: 金币+27, ★★★★★最佳答案 2014-04-08 08:36:53
我也觉得可能pcr失败。注意吸光度不仅是pcr产物才会有的,原料也会有,所以吸光度高不能说明什么问题。
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★欢迎访问【时间管理】版————管理时间,走向成功★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
7楼2014-04-08 08:35:27
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
重做p
8楼2014-04-08 09:11:39
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