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zzl2516

金虫 (小有名气)

[求助] PCR后电泳问题已有5人参与

最近一次PCR出现了令人费解的问题，PCR之后的产物跑电泳跑了两次都是没有条带，但是marker很清晰，但是产物用nanodrop测定结果显示浓度是600多ng/μL，而且纯度还挺高。。。。有人遇到过这种情况么。。。这样的情况是P出来还是没P出来啊。。。
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1楼2014-04-07 10:46:12
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biostar2009

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zzl2516(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-07 18:08:42
概念太不清楚了
PCR产物，不纯化，直接测浓度有什么意义？
或者说，如果你测过没有开始P的和P完之后的，如果浓度降低，哈哈，那有可能出产物了。
用光吸收的方法测浓度，根本分不清楚dNTP，或者free-primer，还是你PCR得到的primer dimer， nonspecific bands或者你的产物。
而且，原理上说，dNTP的光吸收最高，这个封闭系统如果P出东西来了，光吸收还应该下降。
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5楼2014-04-07 15:12:57
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-07 14:45:02
提示：上样缓冲液
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2楼2014-04-07 12:14:54
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-07 14:44:47
结论是啥也没有扩增出，至于你检测没有意义的，引物自扩增也有核酸值。基于比色的原理测定DNA的值，即使是蛋白污染，或者盐离子不同也会给出结果的，所以不足为信。
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3楼2014-04-07 13:07:09
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j2

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-04-07 14:44:53
上个图看看。如果那条道很干净，可能是2楼说的，样没沉到加样孔。如果看得到引物二聚体，那就可能是没p出来哦

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2014-04-07 14:22:19
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