| 查看: 1769 | 回复: 13 | |||
samqueenw银虫 (初入文坛)
|
[求助]
融合蛋白表达只出现前半部分蛋白条带 已有4人参与
|
||
|
最近做融合蛋白，pet21a做载体，融合21kd和28kd的蛋白 构建后的载体经测序没有问题，前边21KD蛋白的终止密码子已经被去除，但是表达诱导后SDS凝胶电泳只在21KD的位置有表达条带（表达条件：37度；分别试了OD600=0.5,0.7,1.0; IPTG终浓度为0.3,0.5,1.0mM；诱导1h，3h，过夜。最后发现只要诱导过夜，就会有出现表达条带） 请各位做过融合蛋白的高手赐教啊  |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有204人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白异源表达，条带大小不对啊
已经有12人回复
- 蛋白表达不出来，是什么原因造成的
已经有7人回复
- 求助关于融合蛋白的linker连接问题
已经有10人回复
- 融合表达蛋白酶的表达
已经有26人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 请问pET30b这个载体在IPTG诱导后有没有可能表达除了目的蛋白以外的其他蛋白？
已经有16人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
已经有10人回复
- 共表达载体只表达出一个蛋白
已经有21人回复
- gst标签蛋白的表达和纯化
已经有17人回复
- 融合蛋白的linker怎么设计
已经有14人回复
- 蛋白电泳 时间变短 条带异常
已经有18人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 辣根过氧化物酶（HRP）能与其他蛋白融合表达吗？？
已经有4人回复
- 融合蛋白在大肠杆菌中的表达，怎么被我越做越复杂了？
已经有8人回复
- 毕赤酵母怎么表达不出融合蛋白？
已经有14人回复
- 【求助/交流】请问如何计算某融合蛋白的分子量
已经有5人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
已经有28人回复
- 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带
已经有41人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已经有10人回复
chlorella409
木虫 (正式写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
4楼2013-12-13 08:41:07
【答案】应助回帖
★ ★ ★
samqueenw(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-20 15:26:26
samqueenw(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2013-12-20 15:26:26
|
楼主这种情况我也遇到过,以下是我的经验,希望对你能有帮助: 我有一个蛋白怎么表达都不溶,没有办法了只好做了个融合蛋白,N端的是可溶的标签蛋白 但是IPTG诱导表达的结果是只看到了对应于融合的N端的可溶标签蛋白有很强诱导条带, 融合蛋白的全长条带很弱或者几乎看不到. 用N端his-tag做纯化可以拿到混合物,其中对应于前半部分的条带明显比对应于融合蛋白全长的条带要深 我把全长融合蛋白用HPLC分离出来, 然后用酶把融合蛋白从中间切开,结果后半部分就全部都沉淀了,上清夜里只有前半部分 我推测是因为融合蛋白的后半部分本身不能正确折叠, 所以e.coli.的某种机制就会倾向于把折叠和溶解度特别好的前半部分切下来. 而且对于融合蛋白来说, 两个融合部分的连接处本来也没有结构,也容易被各种蛋白酶非特异性地切开 |
6楼2013-12-20 03:42:31
samqueenw
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在线: 41.8小时
- 虫号: 2466403
- 注册: 2013-05-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2013-12-05 13:12:33
samqueenw
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在线: 41.8小时
- 虫号: 2466403
- 注册: 2013-05-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
3楼2013-12-13 08:33:25
samqueenw
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 297
- 散金: 50
- 帖子: 25
- 在线: 41.8小时
- 虫号: 2466403
- 注册: 2013-05-15
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2013-12-19 21:24:08
7楼2013-12-20 09:44:24
15879003030
铜虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 57.2
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 96
- 在线: 33.7小时
- 虫号: 2594622
- 注册: 2013-08-13
- 专业: 生物化学
8楼2013-12-20 10:28:59
b6122
木虫 (正式写手)
- 应助: 37 (小学生)
- 金币: 2987.9
- 散金: 1000
- 红花: 5
- 帖子: 636
- 在线: 46.9小时
- 虫号: 172913
- 注册: 2006-01-20
- 专业: 生物医用高分子材料
9楼2013-12-20 11:22:39
chlorella409
木虫 (正式写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
10楼2013-12-20 13:00:13
