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yiye1220

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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帖子: 61
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虫号: 1743088

[交流] 融合表达蛋白酶的表达

大家好我现在在研究融合肽的性质由于研究的抗菌肽太小导师让我在它前面连接了表皮生长因子基因表皮生长因子和抗菌肽之间连接凝血酶识别位点基因（因为考虑肠激酶切割效率问题不打算用肠激酶）现在的问题是要在表皮生长因子前面加一个既不会产生多余残基切割效率又高的蛋白酶序列目的是表达后切掉his标签查了资料感觉可以用TEV蛋白酶但是切割后会有一个gly残基如果以后要做药物开发就会有影响有没有虫友对这方面比较了解希望给出宝贵意见感激不尽

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1楼2012-12-31 16:54:08

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userhung

禁虫 (文学泰斗)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yiye1220(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+4, MolEPI+1, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-31 22:25:11
yiye1220: 金币+3 2013-01-01 13:23:20

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2771223
http://wenku.baidu.com/view/58b176a4f524ccbff12184ae.html
http://wenku.baidu.com/view/484ad0d484254b35eefd344c.html
http://wenku.baidu.com/view/a892093767ec102de2bd89d5.html
http://wenku.baidu.com/view/9a0f0b3083c4bb4cf7ecd1a0.html
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-SPKX200919054.htm
http://www.haodf.com/zhuanjiaguandian/liuhaitaodoctor_111177.htm
http://www.doc88.com/p-676169837475.html

      基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca++、Zn++等金属离子作为辅助因子而得名，其家族成员具有相似的结构，一般由5个功能不同的结构域组成 :（1）疏水信号肽序列;（2）前肽区，主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后，MMPs酶原被激活;（3）催化活性区，有锌离子结合位点，对酶催化作用的发挥至关重要;（4）富含脯氨酸的铰链区;（5）羧基末端区，与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性，但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份，而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。　　
      MMPs几乎能降解ECM中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭转移中起关键性作用，从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视，被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员，编号分别为MMP1～26。根据作用底物以及片断同源性，将MMPs分为4类。　　       Ⅳ型胶原酶为其中重要的一类，它主要有两种形式，一种被糖化，分子量为92kD，命名为MMP-9;另一种非糖化，分子量为72kD，被称为MMP-2。当前对MMP-2，MMP-9的研究较深入。　　
      MMP-2基因位于人类染色体16q21，由13个外显子和12个内含子所组成，结构基因总长度为27kb，与其他金属蛋白酶不同，MMP-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于细胞穿透基质的突出部位，估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。　　
      此外，已证实MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶。MMP-7能作用于明胶和FN。MMP-1的产生范围较广，可由基质纤维母细胞、巨噬细胞、内皮细胞、上皮细胞产生。正常情况下MMP-1阳性率很低，但在各种刺激下可高表达。有研究显示恶性肿瘤中MMP-1高表达与预后相关。　　       MMPs的活性受到三个水平的调节，即基因转录水平，无活性酶前体经蛋白水解作用而激活以及特异性抑制因子（TIMP）的作用。