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枯草芽孢杆菌基因敲除后的回补实验
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本人前期在枯草芽孢杆菌敲除了一个基因，现在要进行回补实验验证，就是把敲掉的基因再整合到基因组上。看了很多文献，还是没有清晰的思路。比如： 1、这段基因就简单的PCR从起始密码子到终止密码子就够了还是需要长一点？如果需要片段长一点是到上游多少bp才可以？ 2、我们实验室只有一种自杀质粒，是否可以用来操作这个回补实验？ 3、很多文献都用到淀粉酶基因amyE，用途是什么呢？ 这些我都不是很清楚啊~本人也即将面临毕业了，还有这个实验卡在这，实在是纠结啊！恳请请各位高手指点！ |
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