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枯草芽孢杆菌转化假阳性 已有2人参与
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站内做枯草的前辈们帮忙分析一下吧，我现在在做枯草纳豆芽孢杆菌的基因敲除，用化转的方法把重组质粒转入纳豆菌后，在含红霉素（0.5μg/ml）的抗性平板上筛选转化子，我加不同浓度的质粒一共涂了16个平板，长了100多个形态看起来就是纳豆菌的菌落，可是用设计的引物PCR验证后却都不是，就很纳闷了，如果说我的质粒没有转进去，没有整合到菌体基因中，那这些菌在抗性平板上怎么会长呢？还那么多！是红霉素浓度太低了？可是浓度增高的话会不会抑制到转化子生长呢？什么原因呢？100多个没有一个是啊！帮忙分析一下吧~  |
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liygmail
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2楼2013-09-03 22:16:50
我也是参考文献上的，我看有的用0.3μg/ml，有的用0.5μg/ml就可以了,我怕浓度太高把我要的转化子也抑制了~我们之前也做过梯度从0.5μg/ml到2.5μg/ml每个梯度的平板上空白（感受态）也都会长两到三个~！今天早上优化培养基，做了个em1.0μg/ml的，明天看看结果怎样~ 3楼2013-09-04 14:19:05
董丽红
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7楼2013-12-01 09:41:25
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