应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 枯草芽孢杆菌转化假阳性
91/1返回列表
查看: 3852  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苞谷芯

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草芽孢杆菌转化假阳性 已有2人参与

站内做枯草的前辈们帮忙分析一下吧，我现在在做枯草纳豆芽孢杆菌的基因敲除，用化转的方法把重组质粒转入纳豆菌后，在含红霉素（0.5μg/ml）的抗性平板上筛选转化子，我加不同浓度的质粒一共涂了16个平板，长了100多个形态看起来就是纳豆菌的菌落，可是用设计的引物PCR验证后却都不是，就很纳闷了，如果说我的质粒没有转进去，没有整合到菌体基因中，那这些菌在抗性平板上怎么会长呢？还那么多！是红霉素浓度太低了？可是浓度增高的话会不会抑制到转化子生长呢？什么原因呢？100多个没有一个是啊！帮忙分析一下吧~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-03 15:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-03 22:38:18
一般情况下，使用红霉素终浓度是5μg/ml，估计你用的红霉素浓度太低了
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-03 22:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苞谷芯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liygmail at 2013-09-03 22:16:50
一般情况下，使用红霉素终浓度是5μg/ml，估计你用的红霉素浓度太低了

3q for u answer，我也是参考文献上的，我看有的用0.3μg/ml，有的用0.5μg/ml就可以了,我怕浓度太高把我要的转化子也抑制了~我们之前也做过梯度从0.5μg/ml到2.5μg/ml每个梯度的平板上空白（感受态）也都会长两到三个~！今天早上优化培养基，做了个em1.0μg/ml的，明天看看结果怎样~
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-04 14:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董丽红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-12 12:14:09
我做的是枯草芽孢杆菌的基因敲除，转化时跟您出现了同样的问题，所使用的红霉素终浓度是5μg/ml，不知为何，不知现在您的问题解决没有？
赞一下 回复此楼
心无止境
4楼2013-09-08 17:40:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苞谷芯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 董丽红 at 2013-09-08 17:40:04
我做的是枯草芽孢杆菌的基因敲除，转化时跟您出现了同样的问题，所使用的红霉素终浓度是5μg/ml，不知为何，不知现在您的问题解决没有？

没有呢，提高红霉素浓度之后长出来的菌pcr验证之后还是不是，现在就在查文献试着优化化转条件看看结果怎样！
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-12 09:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物工程师

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我遇到了类似的情况，我的含有Ery抗性质粒的DH5a能在抗生素培养基上生长，但是之后的提取质粒提不到任何东西（电泳看不到任何东西）。我觉得可能是红霉素的问题。我是用无水乙醇制备的红霉素溶液，你也是吗？希望能通过交流解决这个问题。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-01 09:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物工程师

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议做一个阴性对照，即把不含敲除质粒的枯草芽孢杆菌培养在含红霉素的培养基中，如果也能长出来，可能就是抗生素的问题了，我现在正在做这个对照试验，你也可以等我的结果。
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-01 09:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

红霉素本来就不好用，换一个抗生素标记，比如Amp或者kana看他还长不长。所以淡定就好。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2014-02-20 15:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdajing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，枯草芽孢杆菌的菌落PCR应该怎么做？提取质粒之前应该如何处理菌呢？
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-18 16:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苞谷芯 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:50 by C79jjtjAKjEn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-15 07:26 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 07:02 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:14 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:25 by mibUvS8DDCwf
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭