应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 枯草芽孢杆菌转化假阳性
91/1返回列表
查看: 3258  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

苞谷芯

新虫 (初入文坛)

[求助] 枯草芽孢杆菌转化假阳性 已有2人参与

站内做枯草的前辈们帮忙分析一下吧，我现在在做枯草纳豆芽孢杆菌的基因敲除，用化转的方法把重组质粒转入纳豆菌后，在含红霉素（0.5μg/ml）的抗性平板上筛选转化子，我加不同浓度的质粒一共涂了16个平板，长了100多个形态看起来就是纳豆菌的菌落，可是用设计的引物PCR验证后却都不是，就很纳闷了，如果说我的质粒没有转进去，没有整合到菌体基因中，那这些菌在抗性平板上怎么会长呢？还那么多！是红霉素浓度太低了？可是浓度增高的话会不会抑制到转化子生长呢？什么原因呢？100多个没有一个是啊！帮忙分析一下吧~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-03 15:27:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-03 22:38:18
一般情况下，使用红霉素终浓度是5μg/ml，估计你用的红霉素浓度太低了
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-03 22:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苞谷芯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liygmail at 2013-09-03 22:16:50
一般情况下，使用红霉素终浓度是5μg/ml，估计你用的红霉素浓度太低了

3q for u answer，我也是参考文献上的，我看有的用0.3μg/ml，有的用0.5μg/ml就可以了,我怕浓度太高把我要的转化子也抑制了~我们之前也做过梯度从0.5μg/ml到2.5μg/ml每个梯度的平板上空白（感受态）也都会长两到三个~！今天早上优化培养基，做了个em1.0μg/ml的，明天看看结果怎样~
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-04 14:19:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董丽红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-09-12 12:14:09
我做的是枯草芽孢杆菌的基因敲除，转化时跟您出现了同样的问题，所使用的红霉素终浓度是5μg/ml，不知为何，不知现在您的问题解决没有？
赞一下 回复此楼
心无止境
4楼2013-09-08 17:40:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苞谷芯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 董丽红 at 2013-09-08 17:40:04
我做的是枯草芽孢杆菌的基因敲除，转化时跟您出现了同样的问题，所使用的红霉素终浓度是5μg/ml，不知为何，不知现在您的问题解决没有？

没有呢，提高红霉素浓度之后长出来的菌pcr验证之后还是不是，现在就在查文献试着优化化转条件看看结果怎样！
赞一下 回复此楼
5楼2013-09-12 09:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物工程师

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我遇到了类似的情况，我的含有Ery抗性质粒的DH5a能在抗生素培养基上生长，但是之后的提取质粒提不到任何东西（电泳看不到任何东西）。我觉得可能是红霉素的问题。我是用无水乙醇制备的红霉素溶液，你也是吗？希望能通过交流解决这个问题。
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-01 09:30:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生物工程师

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

建议做一个阴性对照，即把不含敲除质粒的枯草芽孢杆菌培养在含红霉素的培养基中，如果也能长出来，可能就是抗生素的问题了，我现在正在做这个对照试验，你也可以等我的结果。
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-01 09:41:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

红霉素本来就不好用，换一个抗生素标记，比如Amp或者kana看他还长不长。所以淡定就好。
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2014-02-20 15:48:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdajing

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，枯草芽孢杆菌的菌落PCR应该怎么做？提取质粒之前应该如何处理菌呢？
赞一下 回复此楼
9楼2017-10-18 16:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 苞谷芯 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 5/250 2026-03-19 22:18 by 1049232139
[考研] 0703化学调剂 +9 妮妮ninicgb 2026-03-15 13/650 2026-03-19 22:13 by l1006507827
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +8 薛云鹏 2026-03-13 8/400 2026-03-19 15:36 by haoshis
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +7 手机用户 2026-03-17 7/350 2026-03-18 14:34 by vgtyfty
[考研] 331求调剂（0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考博] 26博士申请 +3 1042136743 2026-03-17 3/150 2026-03-17 23:30 by 轻松不少随
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工专硕调剂 +5 heming3743 2026-03-16 5/250 2026-03-17 14:03 by 勇敢太监王公公
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭