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白云恪

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[交流] 【求助/交流】求GFP转化烟草瞬时表达方法已有5人参与

各位大虾，最近要把构建的GFP质粒转到烟草中做瞬时表达，不知道具体方法怎么做，谁有这方面的经验，能说说么，最好有具体的转化方法。谢谢。

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1楼 2010-12-24 11:01:56

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rioarsenal

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rainwander(金币+2):鼓励新虫参与~~~ 2010-12-24 14:39:10

引用回帖:

Originally posted by 白云恪 at 2010-12-24 11:01:56:
各位大虾，最近要把构建的GFP质粒转到烟草中做瞬时表达，不知道具体方法怎么做，谁有这方面的经验，能说说么，最好有具体的转化方法。谢谢。

很简单啊。质粒不是有了么，先转化农杆菌，方法和转大肠杆菌近似；选出阳性菌株，摇2-4小时，制成菌液备用。取烟草（最好是无菌苗）嫩叶生汞消毒，剪成小块或打孔，浸入菌液3-5分钟，然后取出叶块，滤纸吸干菌液，置于固体MS培养基表面，暗培养24-72小时。然后取叶块，450nm激发，560nm检测荧光。

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2楼2010-12-24 11:34:50

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白云恪

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我想知道的是把已经构建好的质粒转进农杆菌之后，在用注射法把农杆菌转进烟草叶的时候用的悬浮农杆菌的液体具体是什么，有的说是MS，10 mM MES medium （pH 5.6）， 150 μM acetosyringone，这里就是只含大量微量和铁盐的MS么？其他的两种是不是用MS溶解呢？我想在苗子里做GFP表达，等到转进两天后再采摘叶子在荧光显微镜下观察。这些能说的详细一些么？？？还有，在做的过程中有什么需要特别注意的那地方么？？

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3楼2010-12-24 14:31:05

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