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爱莫若月

木虫 (小有名气)

[交流] 关于枯草芽孢杆菌转化的问题~

我近期做了枯草芽孢杆菌的电转化，用的载体在大肠杆菌表现氨苄抗性（100ug/ml），在枯草芽孢杆菌是红霉素（0.3ug/ml）抗性。转化后涂平板的时候弄错了抗性，加了氨苄进去，第二天居然也长了菌落出来，不解，这是其一；加红霉素的也长了很多菌落，我挑了氨苄平板上的菌落做菌落PCR，没有转化的没P出来，质粒以及转化的都有条带，然后我又提没转化的枯草芽孢杆菌和转化的菌的质粒，再P，发现转化的可以P出来我的目的条带，这是正常的，但是没转化的也P出来条带了，搞不懂为什么？有没有人可以解答一下啊？

[ Last edited by 爱莫若月 on 2012-6-21 at 10:50 ]
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1楼 2012-06-20 18:11:26
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
★
爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
。。我不知道我理解不行还是你叙述的太迷糊。 后面怎么来了个没有转化的 是什么。能不能描述的再清楚些。

氨苄平板和红霉素平板都长了，注意下抗生素的使用方法是不是正确。

另外我想问下你转化的枯草芽孢杆菌的 具体电击条件，转化的质粒是什么质粒。质粒全长有多少。。
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2楼2012-06-21 09:23:02
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爱莫若月

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 老夏853 at 2012-06-21 09:23:02
。。我不知道我理解不行还是你叙述的太迷糊。 后面怎么来了个没有转化的 是什么。能不能描述的再清楚些。

氨苄平板和红霉素平板都长了，注意下抗生素的使用方法是不是正确。

另外我想问下你转化的枯草芽孢杆菌 ...

没转化质粒的枯草芽孢杆菌，作为阴性对照~抗生素我就是配好加进去的呀~红霉素的浓度太低了，我都不知道起不起作用啊~点击条件是2kv，1mm，电击常数是4.0~4.5
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3楼2012-06-21 10:52:46
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱莫若月 at 2012-06-21 10:52:46
没转化质粒的枯草芽孢杆菌，作为阴性对照~抗生素我就是配好加进去的呀~红霉素的浓度太低了，我都不知道起不起作用啊~点击条件是2kv，1mm，电击常数是4.0~4.5...

我也在做枯草芽孢杆菌的电击转化，能否共享下你的实验方法。包括点转培养基什么的，详细指点下 可以不 ？
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4楼2012-06-21 11:03:36
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爱莫若月

木虫 (小有名气)
内容已删除
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5楼2012-06-21 11:11:18
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l68266152

银虫 (小有名气)
★
爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
如果你确定模板没有污染的话，那么说明未转化的菌你也有你的目的条带或同源度很高的片段，检测时选用质粒上得抗性片段，或者交叉引物检测
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6楼2012-06-21 13:33:49
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爱莫若月

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-21 13:33:49
如果你确定模板没有污染的话，那么说明未转化的菌你也有你的目的条带或同源度很高的片段，检测时选用质粒上得抗性片段，或者交叉引物检测

我不太懂啊，抗性片段是说要设计抗性记忆那段引物去做吗？交叉引物是指什么呢？还望指教
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7楼2012-06-21 14:12:14
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)
★
爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么质粒啊？是将质粒直接从大肠杆菌里提出来后，直接转芽孢杆菌吗？
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8楼2014-03-11 10:54:04
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