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爱莫若月

木虫 (小有名气)


[交流] 关于枯草芽孢杆菌转化的问题~

我近期做了枯草芽孢杆菌的电转化,用的载体在大肠杆菌表现氨苄抗性(100ug/ml),在枯草芽孢杆菌是红霉素(0.3ug/ml)抗性。转化后涂平板的时候弄错了抗性,加了氨苄进去,第二天居然也长了菌落出来,不解,这是其一;加红霉素的也长了很多菌落,我挑了氨苄平板上的菌落做菌落PCR,没有转化的没P出来,质粒以及转化的都有条带,然后我又提没转化的枯草芽孢杆菌和转化的菌的质粒,再P,发现转化的可以P出来我的目的条带,这是正常的,但是没转化的也P出来条带了,搞不懂为什么?有没有人可以解答一下啊?

[ Last edited by 爱莫若月 on 2012-6-21 at 10:50 ]
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)



爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
。。我不知道我理解不行还是你叙述的太迷糊。 后面怎么来了个没有转化的 是什么。能不能描述的再清楚些。

氨苄平板和红霉素平板都长了,注意下抗生素的使用方法是不是正确。

另外我想问下你转化的枯草芽孢杆菌的 具体电击条件,转化的质粒是什么质粒。质粒全长有多少。。
2楼2012-06-21 09:23:02
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爱莫若月

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 老夏853 at 2012-06-21 09:23:02
。。我不知道我理解不行还是你叙述的太迷糊。 后面怎么来了个没有转化的 是什么。能不能描述的再清楚些。

氨苄平板和红霉素平板都长了,注意下抗生素的使用方法是不是正确。

另外我想问下你转化的枯草芽孢杆菌 ...

没转化质粒的枯草芽孢杆菌,作为阴性对照~抗生素我就是配好加进去的呀~红霉素的浓度太低了,我都不知道起不起作用啊~点击条件是2kv,1mm,电击常数是4.0~4.5
3楼2012-06-21 10:52:46
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 爱莫若月 at 2012-06-21 10:52:46
没转化质粒的枯草芽孢杆菌,作为阴性对照~抗生素我就是配好加进去的呀~红霉素的浓度太低了,我都不知道起不起作用啊~点击条件是2kv,1mm,电击常数是4.0~4.5...

我也在做枯草芽孢杆菌的电击转化,能否共享下你的实验方法。包括点转培养基什么的,详细指点下 可以不 ?
4楼2012-06-21 11:03:36
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爱莫若月

木虫 (小有名气)


内容已删除
5楼2012-06-21 11:11:18
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l68266152

银虫 (小有名气)



爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
如果你确定模板没有污染的话,那么说明未转化的菌你也有你的目的条带或同源度很高的片段,检测时选用质粒上得抗性片段,或者交叉引物检测
6楼2012-06-21 13:33:49
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爱莫若月

木虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by l68266152 at 2012-06-21 13:33:49
如果你确定模板没有污染的话,那么说明未转化的菌你也有你的目的条带或同源度很高的片段,检测时选用质粒上得抗性片段,或者交叉引物检测

我不太懂啊,抗性片段是说要设计抗性记忆那段引物去做吗?交叉引物是指什么呢?还望指教
7楼2012-06-21 14:12:14
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feiyun2006

铁虫 (小有名气)



爱莫若月(金币+1): 谢谢参与
你用的是什么质粒啊?是将质粒直接从大肠杆菌里提出来后,直接转芽孢杆菌吗?
8楼2014-03-11 10:54:04
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