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zd1213

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 天使托 at 2012-07-04 11:19:27
你至少得保证你的基因连接到自杀质粒上可以表达,如果不能表达那肯定不行的!...

恩~懂了!歇谢谢大侠~
11楼2012-07-04 20:32:44
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


问下楼主,枯草野生型敲除您用的是什么转化的方法啊,我也在做敲除一年了,还没敲掉啊,马上就要毕业了,哎...
12楼2013-08-19 10:38:28
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bolysu

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

13楼2013-12-03 16:41:46
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zd1213

银虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-03 16:41:46
您好,你的自杀质粒能否惠赠一份呢,非常感谢

不好意思,我已经毕业了,不在以前的实验室了。
14楼2013-12-06 08:59:23
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zd1213

银虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by zhuabachon at 2013-08-19 10:38:28
问下楼主,枯草野生型敲除您用的是什么转化的方法啊,我也在做敲除一年了,还没敲掉啊,马上就要毕业了,哎...

电转化和spizien转化
15楼2013-12-06 08:59:54
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iloveecoli

铜虫 (初入文坛)


换一个同源臂整合上去就可以了。不建议用质粒,因为你的拷贝数是有差异的。
16楼2014-01-26 08:34:37
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


淀粉酶基因是用来做标记位点的,你把你要回补的基因用同样的方法重组到淀粉酶基因上,看淀粉酶是否失活可以片段你的重组有没成功,因为淀粉酶确实对菌株影响不大,操作的话你当时怎么敲掉那个基因现在也这么安进去,以淀粉酶序列为同源臂就行。如果这个基因有自己带的启动子和终止子那么一起P出来,如果没有的话,我觉得应该构建好有功能的基因在放进去,最后一点不是很有把握,你再查查资料吧。
17楼2014-05-06 03:08:53
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