枯草芽孢杆菌基因敲除后的回补实验 - 分子生物 - 综合其他

11楼2012-07-04 20:32:44

zhuabachon

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问下楼主，枯草野生型敲除您用的是什么转化的方法啊，我也在做敲除一年了，还没敲掉啊，马上就要毕业了，哎...

12楼2013-08-19 10:38:28

bolysu

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13楼2013-12-03 16:41:46

zd1213

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13楼: Originally posted by bolysu at 2013-12-03 16:41:46
您好，你的自杀质粒能否惠赠一份呢，非常感谢

不好意思，我已经毕业了，不在以前的实验室了。

14楼2013-12-06 08:59:23

zd1213

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引用回帖:

12楼: Originally posted by zhuabachon at 2013-08-19 10:38:28
问下楼主，枯草野生型敲除您用的是什么转化的方法啊，我也在做敲除一年了，还没敲掉啊，马上就要毕业了，哎...

电转化和spizien转化

15楼2013-12-06 08:59:54

iloveecoli

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换一个同源臂整合上去就可以了。不建议用质粒，因为你的拷贝数是有差异的。

16楼2014-01-26 08:34:37

zhuabachon

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淀粉酶基因是用来做标记位点的，你把你要回补的基因用同样的方法重组到淀粉酶基因上，看淀粉酶是否失活可以片段你的重组有没成功，因为淀粉酶确实对菌株影响不大，操作的话你当时怎么敲掉那个基因现在也这么安进去，以淀粉酶序列为同源臂就行。如果这个基因有自己带的启动子和终止子那么一起P出来，如果没有的话，我觉得应该构建好有功能的基因在放进去，最后一点不是很有把握，你再查查资料吧。

17楼2014-05-06 03:08:53