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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因敲除 回补实验
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

[求助] 基因敲除 回补实验

刚刚敲掉一个基因，敲基因是用的ATMT，标记基因是潮霉素基因。现在想做个回补实验。不知道选择哪个载体，什么筛选标记？请高手指教！
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1楼 2012-11-19 17:19:41
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)
木有人回啊？自己顶！
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2楼2012-11-19 18:24:00
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gyesang

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【答案】应助回帖

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haiwoshishui: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 21:45:36
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2楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-19 18:24:00
木有人回啊？自己顶！

什么载体无所谓，主要是筛选标记， 你可以选着带抗除草剂基因的载体，不知道表述是否准确，印象中记得有这样的载体
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2012-11-19 21:06:01
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-19 21:06:01
什么载体无所谓，主要是筛选标记， 你可以选着带抗除草剂基因的载体，不知道表述是否准确，印象中记得有这样的载体...

奥，那还想问一下用什么方法把这个载体转到敲除突变体里面呢？
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4楼2012-11-19 21:44:24
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-19 21:44:24
奥，那还想问一下用什么方法把这个载体转到敲除突变体里面呢？...

你是做植物还是动物的呢？如果是植物，一般都是农杆菌感染法
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5楼2012-11-20 10:46:21
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 10:46:21
你是做植物还是动物的呢？如果是植物，一般都是农杆菌感染法...

我做的是真菌，敲除的时候就是用农杆菌侵染法。如果还是用农杆菌侵染的话，新载体的导入会不会又产生新的插入突变呢？谢谢！
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6楼2012-11-20 15:12:50
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gyesang

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haiwoshishui: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-11-20 19:15:00
引用回帖:
6楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-20 15:12:50
我做的是真菌，敲除的时候就是用农杆菌侵染法。如果还是用农杆菌侵染的话，新载体的导入会不会又产生新的插入突变呢？谢谢！...

那是会的，所以你要筛选到两个以上的转基因株，他们的插入位置在基因组的不同地方，但都能回复原来的突变表型，就能说明问题了
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7楼2012-11-20 16:49:04
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 16:49:04
那是会的，所以你要筛选到两个以上的转基因株，他们的插入位置在基因组的不同地方，但都能回复原来的突变表型，就能说明问题了...

奥，非常感谢你的回复。我已经开始着手做了，有什么问题再跟你请教吧。谢谢！
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8楼2012-11-20 19:13:45
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gyesang

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引用回帖:
8楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-20 19:13:45
奥，非常感谢你的回复。我已经开始着手做了，有什么问题再跟你请教吧。谢谢！...

祝一切顺利！
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9楼2012-11-21 12:31:53
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