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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

[求助] 基因敲除 回补实验

刚刚敲掉一个基因,敲基因是用的ATMT,标记基因是潮霉素基因。现在想做个回补实验。不知道选择哪个载体,什么筛选标记?请高手指教!
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

木有人回啊?自己顶!
2楼2012-11-19 18:24:00
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gyesang

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haiwoshishui: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-11-19 21:45:36
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2楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-19 18:24:00
木有人回啊?自己顶!

什么载体无所谓,主要是筛选标记, 你可以选着带抗除草剂基因的载体,不知道表述是否准确,印象中记得有这样的载体
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2012-11-19 21:06:01
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-19 21:06:01
什么载体无所谓,主要是筛选标记, 你可以选着带抗除草剂基因的载体,不知道表述是否准确,印象中记得有这样的载体...

奥,那还想问一下用什么方法把这个载体转到敲除突变体里面呢?
4楼2012-11-19 21:44:24
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gyesang

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4楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-19 21:44:24
奥,那还想问一下用什么方法把这个载体转到敲除突变体里面呢?...

你是做植物还是动物的呢?如果是植物,一般都是农杆菌感染法
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5楼2012-11-20 10:46:21
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 10:46:21
你是做植物还是动物的呢?如果是植物,一般都是农杆菌感染法...

我做的是真菌,敲除的时候就是用农杆菌侵染法。如果还是用农杆菌侵染的话,新载体的导入会不会又产生新的插入突变呢?谢谢!
6楼2012-11-20 15:12:50
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gyesang

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haiwoshishui: 金币+15, ★★★很有帮助 2012-11-20 19:15:00
引用回帖:
6楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-20 15:12:50
我做的是真菌,敲除的时候就是用农杆菌侵染法。如果还是用农杆菌侵染的话,新载体的导入会不会又产生新的插入突变呢?谢谢!...

那是会的,所以你要筛选到两个以上的转基因株,他们的插入位置在基因组的不同地方,但都能回复原来的突变表型,就能说明问题了
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7楼2012-11-20 16:49:04
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gyesang at 2012-11-20 16:49:04
那是会的,所以你要筛选到两个以上的转基因株,他们的插入位置在基因组的不同地方,但都能回复原来的突变表型,就能说明问题了...

奥,非常感谢你的回复。我已经开始着手做了,有什么问题再跟你请教吧。谢谢!
8楼2012-11-20 19:13:45
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gyesang

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引用回帖:
8楼: Originally posted by haiwoshishui at 2012-11-20 19:13:45
奥,非常感谢你的回复。我已经开始着手做了,有什么问题再跟你请教吧。谢谢!...

祝一切顺利!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2012-11-21 12:31:53
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