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hyyws

木虫 (正式写手)

[求助] 枯草芽孢杆菌整合质粒pAX01的使用 已有3人参与

准备在枯草芽孢杆菌中整合表达一个外源基因。组长让用整合质粒pAX01进行整合表达。以前没做过整合表达,就想请教高手们,整合表达应该注意些什么问题。
看了下文献,需要事先构建表达元件,启动子打算用p43,请问一下还要准备信号肽吗?还需要准备终止子吗?pAX01上有这些表达元件吗?对这个质粒也认识不多,还请使用过的前辈多多指点!
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余小霞yxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hyyws: 金币+20, 有帮助 2014-03-22 12:53:51
我做过一段时间枯草芽胞杆菌的整合,不过我用的载体是购买的,外源质粒整合进枯草芽孢杆菌基因组主要分为单交换和双交换,不管哪种交换中,所选用的同源臂是非常重要的,直接决定了你的整合效率,当然质粒载体中启动子和终止子肯定是必要的,信号肽的话看你是要外泌还是胞内?
枯草芽孢杆菌
2楼2014-03-20 10:06:28
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hyyws

木虫 (正式写手)

谢谢您的回复。最近组长又让做别的了。这个实验暂时搁置。以后做到了再具体想您请教,还望您到时不吝赐教!
3楼2014-03-22 12:53:11
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余小霞yxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hyyws at 2014-03-22 12:53:11
谢谢您的回复。最近组长又让做别的了。这个实验暂时搁置。以后做到了再具体想您请教,还望您到时不吝赐教!

不客气,相互交流相互学习,我的硕士论文正是做枯草启动子
枯草芽孢杆菌
4楼2014-04-18 16:37:27
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hyyws

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 余小霞yxx at 2014-03-20 10:06:28
我做过一段时间枯草芽胞杆菌的整合,不过我用的载体是购买的,外源质粒整合进枯草芽孢杆菌基因组主要分为单交换和双交换,不管哪种交换中,所选用的同源臂是非常重要的,直接决定了你的整合效率,当然质粒载体中启动 ...

你好,我手上的pAX01是质粒DNA,并不是菌种形式,最近有个师弟想用,我就让他转化大肠杆菌,用红霉素抗性,但是没有提到质粒。想请问你是如何克隆这个质粒的呢?它能在大肠中复制吗?我该如何大量获取该质粒DNA呢?谢谢!
5楼2014-04-22 15:06:33
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

@hyyws 肯定做不出来啦。。。应该用氨苄抗性筛选。。。。
6楼2014-04-22 15:28:29
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cai120320

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好,请问pAX01整合到基因组上是单拷贝吗?
7楼2015-09-02 17:16:45
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挖煤工人牛三斤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 余小霞yxx at 2014-04-18 16:37:27
不客气,相互交流相互学习,我的硕士论文正是做枯草启动子...

我正在在枯草表达,目的基因和载体连接成功后的粗发酵液,蛋白电泳既没有目的条带,也没有酶活力,也做了菌体破碎,请问现在我们应该更换载体,还是更换启动子?我们用的是phy-p43载体。感谢您~
8楼2023-05-30 11:52:57
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