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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 枯草芽孢杆菌整合质粒pAX01的使用
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hyyws

木虫 (正式写手)

[求助] 枯草芽孢杆菌整合质粒pAX01的使用 已有3人参与

准备在枯草芽孢杆菌中整合表达一个外源基因。组长让用整合质粒pAX01进行整合表达。以前没做过整合表达，就想请教高手们，整合表达应该注意些什么问题。
看了下文献，需要事先构建表达元件，启动子打算用p43，请问一下还要准备信号肽吗？还需要准备终止子吗？pAX01上有这些表达元件吗？对这个质粒也认识不多，还请使用过的前辈多多指点！
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1楼 2013-09-17 17:08:45
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余小霞yxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
hyyws: 金币+20, ★有帮助 2014-03-22 12:53:51
我做过一段时间枯草芽胞杆菌的整合，不过我用的载体是购买的，外源质粒整合进枯草芽孢杆菌基因组主要分为单交换和双交换，不管哪种交换中，所选用的同源臂是非常重要的，直接决定了你的整合效率，当然质粒载体中启动子和终止子肯定是必要的，信号肽的话看你是要外泌还是胞内？
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枯草芽孢杆菌
2楼2014-03-20 10:06:28
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hyyws

木虫 (正式写手)
谢谢您的回复。最近组长又让做别的了。这个实验暂时搁置。以后做到了再具体想您请教，还望您到时不吝赐教！
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3楼2014-03-22 12:53:11
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余小霞yxx

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hyyws at 2014-03-22 12:53:11
谢谢您的回复。最近组长又让做别的了。这个实验暂时搁置。以后做到了再具体想您请教，还望您到时不吝赐教！

不客气，相互交流相互学习，我的硕士论文正是做枯草启动子
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枯草芽孢杆菌
4楼2014-04-18 16:37:27
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hyyws

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 余小霞yxx at 2014-03-20 10:06:28
我做过一段时间枯草芽胞杆菌的整合，不过我用的载体是购买的，外源质粒整合进枯草芽孢杆菌基因组主要分为单交换和双交换，不管哪种交换中，所选用的同源臂是非常重要的，直接决定了你的整合效率，当然质粒载体中启动 ...

你好，我手上的pAX01是质粒DNA，并不是菌种形式，最近有个师弟想用，我就让他转化大肠杆菌，用红霉素抗性，但是没有提到质粒。想请问你是如何克隆这个质粒的呢？它能在大肠中复制吗？我该如何大量获取该质粒DNA呢？谢谢！
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5楼2014-04-22 15:06:33
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

@hyyws 肯定做不出来啦。。。应该用氨苄抗性筛选。。。。
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6楼2014-04-22 15:28:29
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cai120320

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好，请问pAX01整合到基因组上是单拷贝吗？
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7楼2015-09-02 17:16:45
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挖煤工人牛三斤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 余小霞yxx at 2014-04-18 16:37:27
不客气，相互交流相互学习，我的硕士论文正是做枯草启动子...

我正在在枯草表达，目的基因和载体连接成功后的粗发酵液，蛋白电泳既没有目的条带，也没有酶活力，也做了菌体破碎，请问现在我们应该更换载体，还是更换启动子？我们用的是phy-p43载体。感谢您~
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8楼2023-05-30 11:52:57
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